A produção de fermentação natural é complexa, custosa, logo o desenvolvimento de fermento natural liofilizado promove vantagens, como maior praticidade, padronização do produto final e qualidade dos pães. O objetivo deste estudo foi elaborar fermentos naturais liofilizados inoculados ou não com cepas de Lactiplantibacillus pentosus 129 (Lpe129) e Limosilactobacillus fermentum 139 (Lfe139) isoladamente e em co-cultura e avaliar seu impacto na qualidade de pães. Diferentes fermentos naturais (FLC – fermento natural sem inoculação; FL129 – fermento natural + Lpe129; FL129 – fermento natural + Lfe139; FLMIX – fermento natural com Lpe129 e Lfe139) foram elaborados e propagados por dez dias, sendo liofilizados e embalados a vácuo, armazenados a 28 °C. Em cada tempo do armazenamento (0, 30 e 60 dias) foram coletados e reativados para a produção dos pães. As etapas de produção dos pães foram realizadas sob mesmas condições para todas as amostras (STEFANELLO et al., 2018). Pão controle foi produzido com adição de fermento comercial. Pães com fermentos naturais liofilizados apresentaram maior poder de acidificação da massa o que contribuiu para aumento da vida de prateleira. Não houve diferença em relação aos volumes dos pães. A umidade apresentou valores menores nos pães feitos com FNL inoculados com Lactobacillus spp. Após 60 dias, os maiores valores de dureza foram observados nas amostras controle e 129, enquanto que o % de envelhecimento foi menor, nesse mesmo tempo, para as amostras feitas com FNL inoculados com Lactobacillus spp. (exceto 139). Em relação aos parâmetros de cor avaliados, as cepas usadas não parecem ter influenciado a cor do miolo dos pães. Os resultados mostram o impacto positivo do uso do fermento natural liofilizado nas características físico-químicas e microbiológicas dos pães elaborados, o que sugere uma maior padronização das características dos pães e o potencial desse tipo de produto para o mercado consumidor.