O processamento de muitos alimentos pode acarretar em perdas da qualidade da cor, e por isso, é frequente o uso de corantes para melhorar a aparência do produto. A tartrazina é um corante sintético e de coloração amarela. Alerta-se, porém, ao seu uso indiscriminado que pode prejudicial à saúde humana. Portanto, a concentração de tartrazina nos alimentos deve ser precisamente conhecida. Um método confiável para determinar a concentração real de tartrazina deve ser validado. Este trabalho segue os parâmetros de validação dados pelas diretrizes da Conferência Internacional de Harmonização (ICH, 2005) para adotar um método analítico baseado em espectroscopia no ultravioleta-visível para a determinação quantitativa de tartrazina em soluções aquosas. Este método foi validado em relação à linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, acurácia e precisão. A curva de calibração obteve um coeficiente de determinação ajustado R2 de 0,999, sendo plotada através da regressão linear com equação “y = 3,7598x + 0,0016”, onde “x” é a concentração de tartrazina e “y” é a absorbância em 424 nm. O valor estatístico obtido pela análise de variância (ANOVA) mostrou que a linearidade pode ser assumida. O limite de detecção e de quantificação foram satisfatórios, 1,520 mg.L-1 e 4,607 mg.L-1, respectivamente. Os valores das taxas de recuperação variaram de 100,3% a 114,6%, apresentando se aceitação quanto à acurácia. Os valores de desvio padrão relativo obtidos para os ensaios de repetibilidade (curto período de tempo) variaram entre 0,48 e 2,99%. Os valores de desvio padrão relativo máximo obtidos para os ensaios de precisão intermediaria foi de 3,59%(inter-dia) e 4,25%(inter-analista) e em ensaio de reprodutibilidade (intra-laboratórios) o valor máximo de desvio padrão relativo foi de 4,19%. Assim, o método para a quantificação de tartrazina usando a técnica de espectroscopia no UV-Vis pode ser considerado adequado quanto aos padrões internacionalmente aceitos.