Uma das dificuldades enfrentadas nas reações de glicerólise é a imiscibilidade dos seus componentes (glicerol e óleo). A adição de surfactantes ao meio reacional tem por objetivo melhorar a homogeneidade do sistema. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade de esterificação (AE) da lipase Lipozyme® TL IM e o índice de peróxido (IP) após reações de glicerólise do óleo de peixe (OP), contendo 10% (m/m) de enzima em relação aos substratos, na razão molar de óleo e glicerol de 2:1, a 40 ºC e 600 rpm durante 48 h. Foram adicionados os surfactantes (Tween 65, 80 e 85 e lecitina de soja,10% (m/m) em relação aos substratos. O IP foi determinado segundo o método AOCS Cd 8-53. A AE foi determinada por titulação através do consumo de ácido oleico. O OP apresentou IP de 1,38 mEq O2/kg de amostra, a AE da Lipozyme® TL IM medida antes da reação foi de 0,27 U/mg. Após as reações, as amostras sem surfactante e com Tween 80 e 85 apresentaram IP e AE semelhantes às condições iniciais. O Tween 65 e a lecitina de soja apresentaram menor IP (0,9237 e 0,4709 mEq O2/kg de amostra) e não conduziram à mudanças na AE. Constatou-se a manutenção da AE após 48 horas, indicando a estabilidade da enzima. Em relação ao IP, para todas as reações testadas não houve aumento do IP nos produtos formados, indicando a conservação da composição dos ácidos graxos originais do OP e a manutenção da qualidade dos produtos.