VALIDACIÓN ANALÍTICA DE HPLC PARA GLUCÓSIDOS DE ESTEVIOL EN PRODUCTOS COMERCIALES DE STEVIA EN POLVO

La stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) se usa ampliamente como edulcorante natural debido al alto contenido de glucósidos del esteviol. Estos compuestos tienen estructuras químicas similares, que varían según el número y la posición de los residuos glucosídicos, lo que dificulta la separación cromatográfica y requiere metodologías analíticas sólidas para el control de calidad. El objetivo de este estudio fue validar un método de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para la determinación de rebaudiósidos D (RD), M (RM), C (RC) y rubusósido (R) en productos comerciales de stevia en polvo. Los análisis se realizaron en un sistema Shimadzu con bomba cuaternaria, detectores UV/DAD y RID, columna C18 (250 × 4,6 mm, 5 μm) y fase móvil en gradiente de agua y acetonitrilo acidificado con 0,1% H₃PO₄, operando a 1,0 mL/min. Las muestras se prepararon por extracción en disolvente acuoso, se filtraron en membranas de 0,45 μm y se inyectaron (20 μL). La cuantificación se basó en curvas de calibración obtenidas con estándares de pureza comerciales ≥99,9%. Los compuestos mostraron tiempos de retención consistentes de 3.770 min (RD), 4.085 min (RM), 9.245 min (RC) y 12.387 min (R). El método demostró linealidad (R² > 0,99), precisión satisfactoria (RSD < 5%) y recuperaciones adecuadas, cumpliendo con los criterios de validación. Para la evaluación de la estabilidad, tres puntos de la curva de calibración (0,8; 1,0 y 2,0 ppm) fueron almacenados bajo congelación por 28 días y reanalizados; la comparación estadística por ANOVA (α = 0,05) no indicó diferencias significativas (p > 0,05), confirmando la estabilidad del método y de los glucósidos en condiciones de almacenamiento. La aplicación de la metodología en tres productos comerciales (A, A2 y AA-801) reveló ausencia de diferencia significativa en el contenido de RD entre las muestras, mientras que para RM y RC se observaron diferencias relevantes: la estevia A2 presentó concentraciones superiores (RM = 7,140 ± 0,317 mg/L; RC = 17,057 ± 0,318 mg/L), mientras que A (RM = 1,717 ± 0,292 mg/L; RC = 3,034 ± 0,041 mg/L) y AA-801 (RM = 5,030 ± 1,160 mg/L; RC = 2,942 ± 1,607 mg/L) no difirieron entre sí para RC. Se concluye que la metodología validada es eficiente para la determinación de glucósidos de esteviol en estevia en polvo, presentando robustez, reproducibilidad y aplicabilidad en el control de calidad de productos comerciales, configurándose como una herramienta confiable para la industria y las investigaciones en ciencia y tecnología de alimentos.