O kefir é considerado um leite fermentado, acidificado e ligeiramente alcoólico, produzido através da fermentação do leite por meio de “grãos” como cultura starter. A matriz é densamente povoada por bactérias ácido lácticas (BAL), bactérias ácido acéticas, e leveduras. Embora, presentes em menor quantidade, as leveduras desempenham um papel importante na preparação de kefir, fornecendo nutrientes essenciais para o crescimento das bactérias ácido lácticas, tais como aminoácidos e vitaminas, e liberam metabólitos que contribuem para o sabor e sensação sensorial do kefir, como etanol e CO2. O trabalho teve como objetivo, a identificação de leveduras de seis amostras de kefir, obtidas na cidade de Santa Maria, RS, Brasil. As amostras foram cultivadas e multiplicadas em temperatura ambiente, com leite integral UHT (ultra high temperature). As leveduras foram então, isoladas em meio de cultivo específico para tais e após o isolamento, realizou-se a extração do material genético, a amplificação por PCR (reação em cadeia da polimerase) e o sequenciamento das cepas. Inicialmente, dezenove cepas de leveduras das seis amostras de kefir foram isoladas, baseando-se em características morfológicas, tais como textura, cor, tamanho e formato. As cepas isoladas foram então identificadas, com os resultados, observou-se que apenas três espécies destes micro-organismos estavam presentes nas amostras de kefir, estas eram: Saccharomyces cerevisiae, Hanseniospora uvarum e Kazachstania unispora. Estudos apresentam que, os gêneros de leveduras Saccharomyces, Candida e Kluyveromices são os mais comumente encontrados em diferentes amostras de kefir. Com os resultados, ressalta-se o fato de que o local e o tipo de cultivo influenciam na diversidade e também nas espécies de leveduras presentes nas amostras de kefir, tal resultado corrobora com trabalhos já realizados, onde mostram que o kefir pode apresentar uma grande diversidade de micro-organismos.