O Brasil é um grande exportador de suco de laranja concentrado, contribuindo com a balança comercial do país. O Alicyclobacillus acidoterrestris é um bacilo Gram-positivo, não patógeno, deteriorante de alimentos com características ácidas. Por ser um microrganismo ácido-termofílico e formador de esporos, sua inativação torna-se muitas vezes ineficiente pelo processo de pasteurização. Os óleos essenciais (OE) podem ser empregados nas mais diversas áreas, inclusive na área alimentar, pois são classificados como GRAS (Generally Recognized as Safe) pela FDA (Food and Drug Administration). O trabalho teve como objetivo avaliar a ação do óleo essencial de Cymbopogon flexuosus contra A. acidoterrestris (CBMAI 0244T), utilizando a técnica microdiluição seriada em microplaca de 96 poços. O meio de cultura utilizado nos ensaios foi o BAT (Bacillus acidoterrestris), com pH 4,0. As concentrações avaliadas do (OE) variaram de 8.000 a 3,9 μg/mL. Para o ensaio da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foram realizadas microdiluições, com adição 5 μL do inóculo padronizado em 104 UFC/mL em cada poço e incubado por 24 horas a 45 ºC. A CIM foi determinada como a menor concentração capaz de inibir o crescimento do microrganismo no poço da microplaca. Para avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM), foram realizados microcultivos de 10 μL em placa ágar BAT dos poços que não houve crescimento bacteriano observado visivelmente. A CBM foi considerada como o não crescimento de colônias após plaqueamento e incubação por 24 horas a 45 ºC. A CIM e a CBM obtidas foram de 1.000 μg/mL e 2.000 μg/mL, respectivamente. Os resultados sugerem que o (OE) de Cymbopogon flexuosus pode ser utilizado como agente antibacteriano frente ao microrganismo A. acidoterrestris, porém, pesquisas são necessárias quanto a sua ação combinada com agentes antibacterianos naturais, citotoxicidade e aplicação em alimentos.