Caracterização estrutural e expressão diferencial de fatores de transcrição bHLH em videira sob estresse biótico

A videira representa uma das culturas mais importantes e exploradas no submédio do Vale do São Francisco, apresentando uma produção de mais de duas safras por ano. No entanto, essa cultura tem sofrido com problemas fitossanitários relacionados ao ataque da bactéria Xanthomonas citri pv. viticola (Xcv), causadora do cancro bacteriano. As proteínas basic helix-loop-helix (bHLH) apresentam atuação reconhecida na regulação de diversos processos fisiológicos e bioquímicos, bem como na tolerância a estresses abióticos e bióticos. Dessa forma, o presente trabalho buscou identificar e caracterizar FTs bHLH em acessos de Vitis spp. contrastantes quanto à resistência a Xcv. Bibliotecas de RNA-Seq foram geradas a partir de mRNAs de tecidos foliares da cultivar Red Globe (susceptível a Xcv) e do híbrido IAC-572 (resistente a Xcv) coletados após 90 minutos de inoculação com o patógeno. Sequências sondas de FTs bHLH foram obtidas nos bancos de dados UniProt e NCBI e alinhadas via tBLASTn (e-value ≤ a e-05) contra o transcriptoma da videira para a busca de sequências candidatas. O ponto isoelétrico e o peso molecular foram identificados por meio do JVirGel 2.0 e a localização subcelular através do Cell-PLoc 2.0. A análise de expressão in silico foi realizada por meio de heatmaps (software CLUSTER 3.0) e visualizados pelo TreeView. Após a mineração no transcriptoma de videira, foram identificadas 434 sequências candidatas não redundantes. Dessas, 70 sequências continham domínio bHLH completo e duas possuíam domínio incompleto com quebra na região N ou C terminal. O ponto isoelétrico e o peso molecular das proteínas bHLH variaram de 4,39 a 9,95 e de 15 a 77 kDa, respectivamente, com todas as proteínas apresentado localização predita no núcleo celular. Sete transcritos se expressaram diferencialmente no RNA-Seq, sendo 3 induzidos e 4 reprimidos no acesso moderadamente resistente. Já no acesso suscetível, a expressão manteve-se constitutiva no tempo de 90 minutos. Os resultados possibilitaram identificar genes bHLH candidatos para o desenho de primers e validação por PCR quantitativa em tempo real e contribuirão para a compreensão dos mecanismos de defesa da espécie contra Xcv.