Proteolytic Activity of Metaloproteases from Bothrops atrox snake venom in the Cleavage of Pro-inflammatory Cytokines Produced by Macrophage

O veneno de cobra é uma mistura de proteínas e peptídeos com potencial biotecnológico. As metaloproteinases de veneno de cobra (SVMPs) são os principais componentes do veneno de cobras Viperidae e desempenham um papel significativo no envenenamento, induzindo hemorragia, fibrinólise e inflamação. Para entender melhor as atividades biológicas dessas proteases, este estudo analisa a ação de SVMPs isoladas de Bothrops atrox , Atroxlysin-I (Atr-I) e Atroxlysin-III (Atr-III), na ativação de macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) (Protocolo CEUA/FUNED 011/2020). Inicialmente, observamos que os BMDMs não produziram IL-6, TNF-α e IL-1β em resposta ao tratamento com SVMPs. Subsequentemente, as células foram ativadas com Pam3CSk4, um agonista do receptor toll-like 2 (TLR2), que está envolvido na modulação da resposta inflamatória induzida pelo veneno de B. atrox . O tratamento com SVMPs após a pré-ativação com Pam3CSK4 leva a um perfil diferente de citocinas. Atr-I inibiu IL-6, Atr-III reduziu IL-1β e ambos diminuíram os níveis de TNF-α. Para determinar se esse fenômeno estava relacionado somente à ativação de TLR2, BMDMs foram pré-ativados também via TLR4 usando lipopolissacarídeo bacteriano ultrapuro (ultrapure-LPS) e tratados com SVMPs, resultando em um perfil semelhante ao de BMDMs não tratados, exceto para IL-1β, que não foi detectado. Demonstramos por ELISA e SDS-PAGE que a redução de TNF-α e IL-6 é devida à clivagem dessas citocinas pelas proteases. Além disso, resultados preliminares mostraram que Atr-I e Atr-III inibiram a ativação de NF-κB e aumentaram a ativação de AKT e ERK1/2, mas não afetaram p38 MAPK. Esses resultados sugerem que SVMPs modulam a ativação de macrófagos e podem ser avaliados em modelos de inflamação e doenças tromboinflamatórias associadas à produção excessiva de citocinas.