Boa tarde, Gustavo! Muito obrigado pelo elogio! Irei responder em ordem para que fique mais fácil de associar as respostas às perguntas. 1 - Sobre o nosso desenho experimental: Utilizamos duas linhagens de macrófagos (Raw 264.7 e J774), tratamos 24h com clotrimazol ou LY e posteriormente estimulamos com insulina. A importância da utilização da insulina se dá pelo fato dessa via ser ativada majoritariamente por insulina o que facilitaria as análises referentes ao funcionamento dos inibidores utilizados e os impactos da inibição dessa via. Em relação ao IL-4 a intenção é exatamente induzir a polarização M2 e avaliar o efeito do CTZ sobre essa polarização. Já temos alguns resultados referentes a essa polarização M2 seguida de tratamento com CTZ, embora não tenha sido mostrados aqui justamente por querermos apresenta-los de forma mais robusta. 2 - Outra forma que temos utilizado para polarizar em M2 é utilizando lactato conforme demonstrado em um trabalho do nosso grupo (OCHIONI et al, 2021). 3 - Sim, todos os resultados de WB foram realizados por mim. Estou repetindo todos os experimentos para que possamos justamente ter relevância estatística. A redução é possível observar quando comparamos a fosforilação no controle estimulado com insulina e clotrimazol estimulado com insulina. 4 – Ainda não saberia dizer o motivo do aumento da fosforilação de S6 quando tratamos com LY, mas é um dos nossos objetivos avaliar essa questão. 5 – Nosso objetivo, além de tornar todos os nossos dados mais robustos, é avaliar todo o mecanismo da ação do clotrimazol sobre a polarização dos macrófagos, descrevendo e analisando todas as vias que possam estar envolvidas. Todos os dados na literatura mostram o papel importante da PI3K nessa ativação macrofágica, mas como essa cascata de sinalização ocorre ainda é bastante discutida. 6 – Nossas perspectivas é continuar avaliando todas essas vias testando também os efeitos do clotrimazol quando polarizamos esses macrófagos em M1 (LPS e/ou IFNgama) e M2 (IL-4 e lactato) por WB e PCR. Além disso, é um dos nossos objetivos avaliar também usando BMDM.  Att, José.

Fico bastante feliz! Muito obrigado! Abraços, José.

Olá, Thayana! Muito obrigado pelo elogio! Nosso grupo já avaliou também os efeitos do clotrimazol em tumores de mama (Furtado et al, 2012; Marcondes et al, 2015; Furtado et al, 2015). Em relação à toxicidade acredito que não há nenhuma observação embora comercialmente o clotrimazol seja vendido somente em formulações de uso tópico e intra-vaginal (com ação antifúngica).

Muito obrigado!!