Existe alguma relação do ZEB1 com os subtipos moleculares de meduloblastoma que você mencionou? Ele está menos expresso nos subtipos que metastizam com maior frequência? Houve associação da expressão de ZEB1 e a sobrevida nos outros subtipos moleculares? Se o ZEB1 promove metástase, por que vocês esperavam que ele fosse menos expresso em pacientes que tiveram metástase? Não entendi essa parte.

Boa tarde Nicolas,

Parabéns pelo trabalho e abordagens utilizadas. A ITGA4 foi um hit recorrente nas analises de omicas realizadas por vocês. Qual o papel biológico que você imagina que essa alteração na integrina alfa4 exerceria nas celulas endoteliais ao interagir com as células circulantes?

Outra pergunta/sugestão seria se vocês planejam avaliar a permeabilidade dessas monocamadas de HUVEC após o tratamento com evoMDA?

Houve avaliação da toxicidade do DMSO para as células?

Oi Ana Luiza,

Minhas congratulacoes pelo teu estudo. Tenho varias perguntas:

1. Por que usou DMSO? Seria devido ao mesmo solvente do inibidor (TSA)?
2. Não ficou claro no resumo se tu isolaste os exossomos ou mesmo as microvesículas, antes de purificar o sobrenadante em tubos AMCON. Apenas no video foi dada a explicacao do procedimento. Aliás qual foi o cutoff da membrana de AMCON usada?
3. Qual foi a viabilidade celular tanto no ensaio com DMSO e com TSA?
4. Qual a toxicidade do DMSO para as células?

Não está claro a razão de não ter executado algum experimento para a visualização de exossomos e microvesículas por microscopia, por exemplo confocal. Ou mesmo usar anticorpo contra CD63. Ou um marcador negativo de vesículas (talvez calnexina). A sociedade Internacional de vesículas extracelular publicou alguns parâmetros que possam ajudar na detecção de EV (Lötvall J, Hill AF, Hochberg F, Buzás EI, Di Vizio D, Gardiner C, et al. Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: a position statement from the International Society for Extracellular Vesicles. J Extracell Vesicles (2014) 3(1):1–6.)

Boa tarde Andressa,

Meus parabéns pela apresentação e pelo trabalho. Seus resultados são muito interessantes.

Fiquei com uma curiosidade quanto a estabilidade das interações entre as proteínas da via MAPK e o Eucalyptol. Esses valores entre -5,1 e -6,8 são considerados altos e bons preditores de interação?

Aparentemente existe uma afinidade maior para ERK2 e CDK4. Você saberia me dizer se já tem algum estudo que tenha usado o eucalyptol e avaliado por Western Blot a ativação de ERK2 ou comparado o eucaliptol com inibidores de CDK4/6?

1 - quais as principais vias que o fato ZEB1 poderia estar envolvido?

2 - quais serão os próximos passos do trabalho?

Oi Lívia parabéns pelo trabalho! Você analisou a expressão de marcadores da EMT nesta amostras? Poderia verificar a se existe alguma correlação entra E-cadherina e ou vimentina com ZEB1 nas amostras analisadas, o que acha?

Minhas congratulacoes pelo estudo. Tenho varias perguntas:

1. A Cdc42 é uma GTPase que parece estar relacionada a divisão celular, interação e migração. Como foi a expressão de CDC42 nas diversas células derivadas de MCF-7?
2. Tu realizaste os mesmos experimentos com outras linhagens de células de câncer de mama? Alguma com maior potencial de metástase?
3. MCF-7 é considerada uma linhagem celular com baixo potencial de agressividade, invasão e até mesmo metástase. Haveria alguma relação da mudança do fenótipo desta célula com a super’expressao de metaloproteinase?
4. Alem de qRT-PCR and Western blotting, por que não incluir um estudo de proteômica quantitativa para ter noção da “expressão” das proteínas?

Oi Lívia vc está online? Viu minhas perguntas?

Prezada Bruna, parabéns pelo trabalho sobre novas prespectivas sobre a XIAP no cancêr de mama. Algumas questões, listadas abaixo, surgiram a respeito da sua abordagem.

- XIAP não apresenta um domínio clássico de interação com o DNA, como os identifcados em fatores de transcrição, portanto minha dúvida é como a XIAP no núcleo pode participar da transcrição dos genes alterados?

- Como esta relacionado a processo de apoptose, a XIAP nuclaer tem alguma diferença quanto a ativação de caspases?

- Por que da escolha do modelo celular de cancêr de mama a linhagem MCF-7?

- Com o estímulo "forçado" de XIAP para o núcleo (através do construto com NLS) houve alguma alteração quanto a morfologia nuclaer ou perinuclear, organização intranuclaer (como estruturas características de eucromatina, heterocromatina ou nucléolo), ou alterações celulares?

- Com o microarranjo foi comentado que XIAP-NLS apresentava redução na expressão global de genes, o que você comentaria sobre realizar um experimento que exibisse uma redução transcricional total, não olhando para genes, mas para conteúdo de mRNA total?

Parabéns mais uma vez !

Prezado Nicolas, excelente as abordagens e análises utilizadas no trabalho. Parabéns! tenho algumas perguntas. De antemão agradeço pela possibilidade resposta.

- Há perspectiva de tratar as HUVECs com exoMDA, e após realizar ensaio de interação com as células MDA-MD-231? Caso positivo, como essa abordagem celular poderia ser ampliada para um nível molecular?

- Como a PI3K foi uma das vias majoritárias identificadas nas análises, esta poderia ser foco da estudos de interação das células do seu modelo utilizando inibidores dessa via?

- Dos modelos de cancer de mama, a MDA-MB-231, é bem estudada e reflete o fenótipo do subtipo triplo-negativo, mais adequadamente ao claudin-low.  Outros modelos celulares poderiam também ser estudados quanto ao conteúdos de seus respectivos EVs, ou ainda, de forma mais hipotética, a intenção de pré-incubar HUVEC com exoMDA e desafiar o modelo de interação com linhagens distintas de outros subtipos.

Parabéns mais uma vez. 

Prezada Ana Luiza, parabéns pelo trabalho em andamento e pela excelente apresentação dos resultados obtidos até então. Tenho algumas dúvidas e agradeço desde já pelas respostas.

- Como foi feita a comprovação/validação de inibição das iHDAC após tratamento?

- Das vias de sinalização identificadas como "exosome - pathway (Blood coagulation, CCKR, ...)" melhor poderia se relacionar com o mau prognótico do GBM? 

- As proteínas RABs identificadas já foram identificadas em exosomas de outros tumores? ou somente a expressão estava realcionada ao potencial oncogênico dos tumores em geral?

Parabéns e sucesso com o trabalho