O polimorfimo na região 1719 ( exon 3) parece ter efeito protetor, porém alguns pacientes apresentam a doença, mesmo na presença desse polimosrfismo. Já foi descrita qual ( e o local no gene) da mutação associada á esse polimorfismo, nesses pacietnes?

Parabéns pelo trabalho, Jéssica! Fico feliz em acompanhar trabalhos desenvolvidos pelos alunos da UEZO!

A revisão sistemática realizada ressalta a importância de se estudar a etiologia do Osteosarcoma.

Tenho alguns pontos metodológicos a perguntar:

- Com a baixa incidência da doença no hospital de referência, vocês já pensaram em realizar um estudo colaborativo com outros centros?

- Você comenta na apresentação que o número de casos e controles precisa ser aumentado. De posse dos dados obtidos através da revisão sistemática, é possível aplicar testes de cálculo amostral utilizando os valor de odds ratio de estudos prévios e ter uma noção mais próxima do quanto esse n precisa ser aumentado. Vocês já prospectaram esse ponto?

- Futuramente vocês pretendem correlacionar a ocorrência dos polimorfismos com que variáveis?

Boa tarde Michelle,

Parabenizo pelo trabalho!

Gostaria de lhe perguntar como vc poderia explicar a diferença de 'comportamento' entre os dois clones que vc avaliou? Esses resultados te levariam a escolher um ou outro para prosseguir com o trabalho? Caso sim, qual seria e pq?

Vocês chegaram a pensar em outra abordagem além de nocautear o mutante M237I? Já são conhecidos os mecanismos que induzem a agregação da P53 M237I?

A OPN está aumentada nos tumores, comparados com os controles e está relacionada a pior taxa de sobrevivência. Por que  a taxa de sobrevivência não foi diferente dos tumores que tinham diminuição da expressão de OPN?

Bom dia Juliana!

Parabéns pela originalidade do trabalho e pela excelente apresentação! Poderia me explicar como foi realizado o isolamento dos NETS produzidos in vitro, pela estimulação nos PMN com o PMA? Também gostaria de saber se na sua opinião, você acha que seria interessante a inclusão de um grupo (para cada linhagem) associando NETS+DNAse+Elastase.

Olá Eliza, parabéns pela apresentação e pelo trabalho!

Tenho alguns pontos a discutir com você:

- Você poderia comentar um pouco mais sobre os pacientes incluídos no estudo? Qual a naturalidade dessas pacientes?

- As amostras utilizadas foram coletado no momento do diagnóstico ou elas já tinham recebido algum tratamento prévio? 

- Vocês realizaram algum cálculo amostral para identificar o número ideal de controles a serem testados?

- Sobre a frequência do polimorfismo estudado, qual a frequência que você esperava encontrar? Você acha que a ausência de associação com o polimorfismo estudado pode estar sendo influenciada por alguma variável? 

- Você comparou casos e controles através de odds ratio?

Boa tarde Eliza! Parabéns pela apresentação extremamente didática! Minha pergunta é sobre o desenho experimental dos próximos passos: como vocês pretendem confirmar os resultados encontrados?

Parabéns Paula e Equipe pelo excelente trabalho.

Dúvidas:

Além da expressão do P53, estes tumores/pacientes que respondem melhor a radioterapia apresentam outras características comuns que poderiam ser considerados fatores de risco? Qual foi o N do trabalho inicial do grupo?

Que outros experimentos não realizados poderiam ser utilizados para compreender o papel do miR-210?

Qual seria a aplicação prática destes resultados de pesquisa básica?

Mais uma vez, parabéns!

Cordialmente,

Profa Jamila Perini

Laboratório de Pesquisa de Ciências Farmacêuticas – LAPESF UEZO

Instagram @lapesf.uezo

Boa tarde Anna Beatriz, meus parabéns pelo excelente trabalho! Achei incrível a caracterização da região mínima necessária para a atividade promotora. Mas eu tenho uma dúvida, qual foi o racional para selecionar os fragmentos menores de 366 e de 140 nucleotídeos? Teve um motivo específico ou foi aleatório?

Todos os experimentos foram feitos com as células HEK293T? Vocês pretendem avaliar PALB2 em células de algum modelo tumoral como mama ou pâncreas? Quais são os próximos passos do projeto?

Parabéns Isabella e grupo pelo estudo. Isabella, como será feito o estudo de expressão das isoformas? Quem serão os controles de avaliação do seu estudo? 

Olá Marcos. Parabéns pelo trabalho e o seu grupo na investigação. Como foi feita a seleção deste marcador? O grupo já tinha estudos anteriores que indicavam ele como um possível alvo? Foi uma busca literária? 

Boa tarde Igor, meus parabéns pelo belo trabalho! Tenho algumas dúvidas: Como é feita a superexpressão do miR34a e a inibição do miR125b? É ao mesmo tempo? Por quais técnicas?

No resultado do blot (Apoptotic protein expression in miR34a overexpression and miR125b inhibition in wt p53 cell line (A172)), falta a confirmação da superexpressão e da inibição dos miRNAs. Como vocês confirmaram a superexpressão e da inibição desses miRNAs?

Você acredita que a resposta ao dano do DNA nas células p53 wt ocorre mais rapidamente do que nas células com p53 mutado devido a que?

O que mais vocês pretendem fazer de experimentos para elucidar os papéis dos miR34a e miR125b nas células mutadas para p53?

Olá Fernanda, parabéns pelo trabalho e grupo pela investigação. Como vocês pretendem investigar (técnica) a metilação das 4 ilhas CpG?

Primeiramente Juliana, parabéns pelo seu trabalho! O papel dos NETs na modulação da apoptose de tumores de mama já foi anteriormente descrito por outros grupos? E em relação a outros tumores, esse papel já foi caracterizado?

Michelle, parabéns pelo seu trabalho! Como vocês fizeram a medida do wound healing? Foram realizadas fotos das culturas em diferentes tempos e a quantificação foi feita através de algum programa computacional? Você já pensou em medir a proliferação dessas células para descartar a possibilidade do fenômeno observado nesse ensaio ser devido à redução proliferação? Uma sugestão também seria realizar o ensaio usando uma membrana de transwell para a confirmação da redução da migração celular. 

Parabéns pelo trabalho. Os resultados são bastante promissores. Gostaria de saber se o miR-210 influencia a angiogênese e a ativação do processo de transição epitelial-mesenquimal, que em tumores epiteliais malignos, o potencial metastático tem sido relacionado a este evento.

Prezada Anna,

Excelente e clara apresentação. Parabéns.

Você poderia explicar os pontos abaixo:

1. Tentaram validar a interação da PAB2 com ROCK2, usando ROCK2 como "bait" ou por outra técnica?

2. Qual a justificativa da expressão de PALB2 aumentar e depois diminuir ao longo da IR? Assim como com o aumento da concentração de olaparibe? O que explica este comportamento?

Obrigado e parabéns novamente.

Fábio

Excelente trabalho jade. As alterações observadas de ganho ou perda de função alteraram a expressão gênica, correto? E a expressão proteica, vocês chegaram a avaliar de alguma forma? Penso que no caso das mutações, por exemplo, elas poderiam ser sinônimas e não alterarem a expressão proteica. 

Olá Mariana,

Vou deixar minha pergunta aqui enquanto circulo pelos outros posteres... nesse meio tempo fique à vontade para ir respondendo.

Vamos lá...

Mariana… Sobre o mecanismo de regulação envolvendo ABCB1 e COX2.

Tirando o ensaio de docking computacional de vcs, existe algum outro dado na literatura que suporte a inibição de ABCB1 por AS?

Existe algum outro inibidor conhecido deABCB1 que pudesse ser utilizado para testar se seria capaz de mimetizar os resultados observados com AS?

Fiquei pensando se seria possível que o que vcs estejam vendo seja um mecanismo compensatório sim, mas decorrente da inibição de COX2 e não necessariamente de ABCB1. Faria sentido?

Olá Fernanda, parabéns pelo trabalho! Gostaria de saber melhor a função do GATA6 no pâncreas. Nos outros tumores também se aplica a relação inversa da expressão de GATA6 com o prognóstico?

Parabéns pelo trabalho. O estudo esta muito bem estruturado e os resultados são bastante promissores. Vocês estudaram a expressão de marcadores epiteliais e mesenquimais a nível de mRNA. A expressão de proteínas também é modulada em resposta ao 5-HT? Vocês já investigaram alguma coisa no contexto de resistência a drogas no seu modelo de estudo?

Parabéns pela apresentação!! Foi feita alguma caracterização dos receptores de 5-HT expressos nestas células? Também foi avaliada a atividade de SERT e os processos de serotonylation? Vocês pensaram em fazer comparação com algum fármaco agonista dos receptores 5-HT ou SSRI?

Obrigado!

Olá, Natália!

Parabéns pelo trabalho, muito interessante!

Fiquei com algumas dúvidas em relação ao modelo com linhagens.

Você mostra em um slide mais inicial que a linhagem MDA-231 expressa a p53 mutante, a MCF-7 a p53 WT e a H1299 não expressa p53. Mas os resultados de MTT e LDH parecem bem semelhantes entre as linhagens. Vocês esperavam isso?

Como vocês pretendem avaliar se a indução da morte com o tratamento com heparina tem relação com a p53?

O que você acha que levou a diferenças tão grandes entre os ensaios de MTT e LDH?

Uma sugestão é vocês calcularem o IC50 desses ensaios! Fica melhor para comparar!

Obrigada!

Parabéns ao grupo pelo trabalho e a Renata pela apresentação. Trabalhos buscando alvos para rastreamento de doenças silenciosas são de extrema importância e podem trazer grande impacto para a saúde pública. Algumas pequenas dúvidas:

1 - Existe alguma diferença entre na malignidade associada a doença causada por cada um dos subtipos que vocês investigaram? Progressão, recidiva, resposta a tratamento farmacológico? É possível a co-infecção por mais de um subtipo?

2 - HPV é um vírus considerado bastante prevalente na população, e muito se discute sobre a importância da vacinação. Existem dados sobre o efeito da vacinação contra o HPV para a prevenção da RRP?

3 - Vocês concluíram que o HPV só pôde ser detectado na saliva de pacientes com doença ativa, que já requereria intervenção cirúrgica. Isso não seria uma limitação, claro, considerando o atual estado do projeto? Qual seria um próximo passo visando aumentar a especificidade do ensaio? Existe algum outro marcador molecular que poderia ser co-expresso, ou liberado em resposta à uma infecção inicial?

Parabéns a todos pelo trabalho!

Olá Gustavo,

Vou colocar aqui a minha pergunta e dar uma volta nos outros posteres... enquanto isso, fique à vontade para ir respondendo.

Vamos lá...

Qual o critério utilizado por vcs para definir o polimorfismo que está sendo estudado? Quão frequentes são esses polimorfismos nesse tipo de câncer (Leucemia?). Os resultados obtidos para esses polimorfismos caracterizados por vcs podem ser extrapolado para os demais polimorfismos encontrados nesses mesmos genes?

Olá Thales! Está por aí?

Vou colar minha pergunta aqui embaixo para ir adiantando e dar uma rodada pelos outros posteres... se quiser ir postando a resposta, eu já volto.

Vamos lá…

Fiquei curioso com os resultados referentes a borda C terminal de BRCA1.

Achei interessante que a deleção da Y1863 tenha sido suficiente para impactar a capacidade transcricional de BRCA1 no sistema de Luciferase.

Na verdade, achei ainda mais interessante o fato de que a perda dos 5 resíduos subsequentes não tenham um impacto acumulativo, o que sugere que possam estar atuando em conjunto com Y1863.

Pergunta: Vcs pretendem gerar mutantes independentes desses resíduos para aa “inertes” (ex. alaninas)? Em outras palavras, substituir cada um deles isoladamente por uma alanina a partir do Y1863 até o I1858, mas mantendo os demais aas íntegros?

Isso daria uma medida se o fenótipo observado é decorrente, simplesmente, de uma questão espacial (de tamanho da borda C-terminal) e independentemente da composição ou se é algo mais “refinado” e que dependa das propriedades químicas dos aas que compõem essa borda.

Olá Karolyne,

Vou deixar minha pergunta aqui enquanto visito os outros posteres... fique à vontade para ir respondendo e daqui a pouco eu retorno.

Vamos lá...

Vc encerra a sua apresentação falando sobre a clonagem dos genes IKZF2 e 5, mas nnao explica a razão pela qual está fazendo isso. Tem a ver com alguma abordagem para validar o modelo de regulação de CRLF2 por esses fatores transcricionais?

Você poderia explicar mais detalhadamente a razão pela qual está clonando esses genes?

Olá Thales! Parabéns pelo seu trabalho e apresentação.

Gostaria de saber qual ou quais outros ensaios funcionais de validação você considera que poderiam ser realizados para refinar ainda mais a classificação das variantes identificadas em BRCA1?

Marianna, parabéns pelo trabalho! A apresentação foi clara e objetiva!

Gostaria de fazer algumas perguntas:

1 – Você mencionou no seu relato de caso que o paciente foi classificado pertencente ao subgrupo IKZF1plus, que apresenta um prognóstico bastante negativo. Qual a média esperada de sobrevida para os pacientes categorizados nesse subgrupo?

2 - O paciente em questão foi a óbito em menos de 1 ano após o diagnóstico. Na sua opinião, os SNPs identificados em vias importantes do sistema de reparo de DNA (BER, NER e HRR) contribuíram para esse desfecho? Outros pacientes incluídos no estudo também apresentaram SNPs nessas vias? E existem trabalhos na literatura que corroboram com esse achado?

3 – Você citou na apresentação que alguns estudos ainda estão em desenvolvimento para tentar explicar a ocorrência de alterações somáticas da LLA infantil. Quais estudos adicionais vocês pretendem realizar?

Olá Jade, parabéns pelo seu trabalho!

Você explica na sua apresentação os filtros que foram aplicados na seleção dos genes alvo. Gostaria de saber como foi determinado o valor de 6% para o último filtro aplicado?

Olá Daniel, parabéns pelo seu trabalho!

Gostaria de te fazer duas perguntas. Qual a frequência de mutações em PALB2 em pacientes com câncer de mama? Existem pacientes que apresentam mutações tanto em BRCA2 como em PALB2, ou estas mutações são excludentes?

Boa tarde, Daniel. Parabéns pelo seu trabalho. 

Gostaria de te fazer algumas perguntas. 1- Há quanto tempo você participa deste trabalho? E qual o seu envolvimento nos experimentos apresentados? 

Olá Mariana, parabéns pelo seu trabalho.

Após o tratamento com ASA, você esperaria que houvesse também uma redução da viabilidade celular? Se sim, o que poderia explicar os resultados que vocês obtiveram neste experimento?

Primeiramente, parabéns pelo trabalho!

Além disso, parabéns ao grupo por conduzir tão bem o estudo a cerca do papel das OPNs, não apenas com relação aos tumores de ovário mas também nos tumores prostáticos.

É notável que a alta expressão da OPNc está associada com eventos relacionados à progressão tumoral, envolvendo a via de PI3-K. Considerando todos os dados que o grupo já produziu, vocês acreditam que a OPNc pode ser utilizada como um biomarcador para o diagnóstico/prognóstico do câncer de ovário e também como um marcador indicativo de progressão?

Oi Marianna,

Gostaria que me explicasse melhor a sentença: "...Furthermore, the cellular responses to damage, as those caused by chemotherapy, depend on DNA repair mechanisms that can counteract those damages, allowing cancer cells to thrive..."

Ao ler a sentença, dá-me a impressão de que o tratamento quimioterápico "nunca" surte efeito na recuperação do paciente, pois parece-me que "todas as células" conseguem se recuperar e neutralizar o dano causado pela quimioterapia. Haveria uma forma melhor de reescrever a sentença?

1 - quais seriam os mecanismos de ação dos genes selecionados e identificados?

2 - quais serão os próximos passos de modo a comprovar a hipótese?

Thayana, primeiramente, parabéns pelo trabalho!

RNAs intergênicos são realmente intrigantes e podem desempenhar importantes papéis na regulação gênica e em doenças. Contudo, tanto na parte da biologia molecular quanto computacional ainda faltam métodos para sua predição... Embora já saibamos que muitos transcritos são associados a lncRNAs, ainda não se sabe muito a respeito dos papéis exercidos pelos lncRNAs, certo? Nesse trabalho vocês já identificaram 6.200 RNAs intergênicos (293 up e 70 down) em pacientes CRLF2-high em relação aos pacientes CRLF2-low. Vocês chegaram a avaliar as vias ou processos nos quais os RNAs up ou RNAs down estão envolvidos, exclusivamente?

Parabéns a todos do grupo e em especial a Natalia  pela apresentação. O trabalho é muito interessante por estudar o efeito de um composto de larga utilização na clínica, mas com mecanismos de ação ainda não totalmente esclarecidos.

1 - A escolha das linhagens para cobrir as possibilidades de mutação em p53 é elogiável. Porém, mesmo recorrendo ao resumo, não ficou muito clara a importância da mutação R280K. Ela tem relevância epidemiológica (p.ex. para o câncer de mama), ou é um modelo de estudo? Está associada com perda ou ganho de função?

2 - Logo nos primeiros resultados, vocês destacaram um possível efeito na indução de um estado oligomérico da p53. A existência desses oligômeros poderia ser considerada um fator de risco para o câncer de mama (ou algum outro), ou então um indicador de um estado pré-maligno? Existem estudos em pacientes que fazem uso regular de heparina, como aqueles com problemas de coagulação?

3 - Qual foi a racional para a escolha das concentrações de heparina utilizadas nas culturas de células? Elas apresentam algum paralelo com o que se vê na clínica, de forma que seria possível se chegar a uma concentração profilática de heparina?

4 - Pude observar uma certa discrepância entre os resultados de MTT e LDH, bem como de uma (possível) sensibilidade um pouco maior da linhagem H1299. Poderia comentar um pouco mais sobre isso aqui?

5 - Uma curiosidade mais distante, mas existem doenças lisossomais que levam a acúmulo de GAGs, glicolipídios, carboidratos, etc. Sabe-se pouco sobre essas doenças, mas vocês já observaram algum estudo que relacionasse essas doenças com o estado da p53 nesses pacientes?

Muito obrigado e parabéns pelo trabalho!

Prezada Vanessa, parabéns pelo enrriquecido trabalho sobre CDK e BRCA. Gostaria de fazer algumas perguntas listadas abaixo para melhor entendimento do seu trabalho.

- Somente mais para o final da apresentação foram mencionadas os modelos celulares onde foram realizados as abordagens, a parte de interação entre CDK e BRCA foram realizados em MCF-7?

- Para avaliação de HR e NHEJ, os experimentos foram realizados sem estímulos para cada um desses tipos de reparo de DNA? ou seja, a avaliação foi realizada no processo basal desses mecanismos?

Mais uma vez parabéns pelo trabalho e agradeço antecipadamente pela possibilidade das repostas.

Olá Mariana,

Estou avaliando a sua apresentação e tenho algumas perguntas mas que vou guardar para o dia do Simpósio. Para não perdermos tempo no dia do simpósio, vou deixar aqui duas sugestões para futuras apresentações que vc venha a fazer.

Sei que o tempo foi curto e que por conta da qtd de resultados vc precisou acelerar a apresentação, mas seria importante que em futuras apresentações, ao invés de simplesmente apresentar os resultados, que vc fosse tb concluindo o que aquele resultado sugere e explicando a motivação do experimento seguinte. Isso ajuda bastante a audiência a acompanhar a sua linha de raciocínio.

Sobre o modelo final, existe uma notação clássica em sinalização celular onde uma seta indica uma regulação positiva e uma reta com um tarço perpendicular em uma das extremidades indica uma regulação negativa (ou inibitória). Com isso vc não precisa usar sinais de + ou - para poder indicar a se a regulação é positiva ou negativa, pois essas notações são auto-explicativas... isso tb diminui a quantidade de informação gráfica que vc precisa colocar no seu modelo final.

No mais, gostei muito e conversamos no dia 08/11.

Até lá!