Proceedings of Oncobiology Symposiums
Proceedings of XIV Oncobiology Symposium

Nas suas perspectivas vocês pretendem extrair e analisar alcalóides e ácidos graxos da Didemnun sp. Os alcalóides são conhecidos na literatura por suas atividades biológicas e químicas. Qual atividade vocês esperam ver em relação aos ácidos graxos? Por que analisar este tipo de composto frente ao GBM?

Boa tarde,Fabiana

Me chamo Flavia Vasconcelos e vou avaliar o seu trabalho.

Parabéns pelo trabalho.

Como vocês sabem se os efeitos observados refletem a dupla inibião de PI3K e HDAC ou apenas PI3K?

Tendo em vista que o percentual de células vivas em 24h é mínimo qual o benefício de analisar migração? Mesmo na menor concentração dos inibidores a grande maioria das células está morta ou em processo de.. O resultado do ensaio de migração pode ter sido reflexo da morte e não da inibição da migração. Seria possível testar concentrações menores dos inibidores?

Vocês pretendem analisar a toxicidade em células de indivíduos saudáveis. Talvez as concentrações utilizadas neste estudo sejam altas demais e, portanto, tóxicas.

Vocês observaram diferenças quanto ao perfil mais correspondente ao M2? Quais as principais diferenças em relação asos marcadores? E quais as características que diferenciam esses novos perfis descobertos dos já conhecidos?

Qual o controle utilizado? Usaram algum composto padrão que possua um IC50 considerado efetivo para essas células testadas ou só compararam com a literatura? Caso tenha sido por comparação, qual o resultado obtiveram? 

Olá Fernada, tudo bem?

Primeiramente, parabéns pelo trabalho! Gostaria de aproveitar a oportunidade para entender melhor alguns pontos.

Esse trabalho possui como objetivo avaliar a expressão de EPCAM por RT-PCR no tecido tumoral e adjacente de pacientes com carcinoma de células escamosas de laringe (o tipo histológico mais prevalente) e a possível associação entre a expressão de EPCAM e as características clínico-patológicas.

1. A proteína EpCAM é expressa em epitélios normais e superexpressa em células tumorais de diferentes origens (como ovário, mama e próstata) e se correlaciona, muitas vezes, com pior sobrevida global. Parece que essa superexpressão é mais pronunciada nas células iniciadoras de tumor (TICs). Levando em consideração essa distribuição dita “ubíqua” de EpCAM em carcinomas e TICs, como a EpCAM pode servir como um biomarcador confiável e qual pode ser a vantagem para as TICs expressarem essa molécula?

Olá Danielle! tudo bem? 

realmente essa pandemia no início do doutorado esta sendo bastante desafiador para você né? parábens pelo vídeo, gostei bastante.

Gostaria que você me explicasse, por favor, qual tipo de atividade neuromoduladora você pretende testar em esferóides? quais moléculas e/ou vias serão avaliadas e qual motivo?

Igor e colaboradores, inicialmente gostaria de parabenizar a todos por esse trabalho! 

Deixo algumas perguntas sobre o trabalho:

1) Qual é o tipo de radiação ionizando?

2) Você poderia falar um pouco mais sobre o papel do miR-34a e miR-125b na regulação da dinâmica de reparo de DNA frente a um insulto como a radiação ionizante? Já existe algo descrito em outros modelos?

3) O miR-125b reconhece e inibe a tradução tanto do RNAm do P53wt quanto da P53mut? Da mesma forma, o miR-34a é regulado tanto pela P53wt quanto mutada?

4) Baseado nos dados de subG0 a linhagem P53mut U251 parece ser mais sensível aos efeitos genotóxicos da radiação do que a T98G. Existe alguma diferença substancial entre essas linhagens em termos de mutational profile em genes de reparo que poderia contribuir para esse fenótipo?

Olá!

Gostaria de te parabenizar pelo excelente trabalho!

Gostaria de saber o quão distante estamos de aplicar essa metodologia atualmente, quais são as dificuldades e limitações.

Atenciosamente,

Andrea

Os autores têm alguma hipótese para tentar explicar o elevado percentual de morte dos pacientes envolvidos no estudo?

Oi Thayana,

parabéns pelo excelente estudo. É impressionante e acertivo como em um universo de 6,200 lincRNAs você conseguiu alvos bem definidos up- e down-regulados. Muito bom pra orientar o estudo. Excelente! Eu gostaria de entender melhor o que havia de indício na literatura (se havia) para você "apostar" nos lincRNAs na regulação desse receptor? Entendi que já há lincRNAs associado ao prognóstico das leucemias em geral, e , em paralelo a superexpressão de CRLF2 no mal prognóstico das LLAs tipo B, mas perdi o raciocínio desse link entre os dois, se é que já existe ou não, se é inédito.

Sobre a parte funcional, há diferentes informações entre modelos in vitro e in vivo quanto a associação de STAT5 e/ou PI3K/mTOR por exemplo, com a superexpressão de CRLF2. Você tem idéia do status dessas moléculas na linhagem GM12878 ? Pretende fazer essa parte com outras linhagens? 126 é uma casuística bacana, vc tem quanto tempo ainda pra elaborar essa rede associada aos CRFL2high? 

Boa tarde, Bianca. Parabéns pelo trabalho.

Dúvida 1) você mencionou que o extrato bruto não teve nenhuma toxicidade em fibroblastos. Que dados são esses? Por que eles não foram mostrados? Eles já existem ou você ainda pretende fazer? Isso não ficou claro pra mim

Dúvida 2) Na metodologia você diz que "o ciclo celular foi avaliado por citometria de fluxo". Também menciona a coloração com DAPI. Qual a intenção da coloração com DAPI? E mais importante, onde estão esses dados?

Dúvida 3) Você menciona como objetivo futuro fazer experimentos in vivo com compostos isolados. Imagino que depois de caracterizar quais compostos tem atividade citotóxica. Considerando que isso já tenha sido feito, como vc pretende fazer os experimentos in vivo? Já sabe qual modelo irá usar?

Olá Luciana. Meus parabéns a você e a todos os envolvidos nesse trabalho! Queria tirar uma dúvida e conversar sobre as perspectivas do seu trabalho.

Minha dúvida é mais uma particularidade metodológica. Na figura 2c de seu poster há um IB das proteínas de interesse na fração citoplasmática e na fração nuclear. Existe marcação para a forma fosforilada de Akt em ambas as frações. No entanto a marcação para Akt total só é observável na fração citoplasmática. Se temos Akt fosforilada no núcleo não deveríamos ter também marcação para Akt total nessa fração?

Os resultados que vocês já obtiveram me parecem muito promissores e de fato acredito que uma co-imunoprecipitação de Akt e FOXK2 será muito importante para reforçar ainda mais essa via de regulação proposta. Em sua apresentação por vídeo, você destacou que FOXK2 pode também se comportar como um promotor tumoral em outros tipos de câncer. Você acredita que isso ocorreria por uma regulação diferencial das vias que vão levar (ou não) a fosforilação de FOXK2 ou seria algo mais relacionado com distintos alvos transcricionais de FOXK2 em si?

Parabéns pelo trabalho! Muito interessante. Você pode me explicar como funciona o teste de MTT e por que você acha que as frações em acetato de etila obteve a maior atividade citotoxidade? Você tem ideia da classe de compostos extraídos por esse solvente?

Olá, Rafaela! Parabéns! Seu trabalho é muito interessantes. Algumas dúvidas minhas já foram sanadas aqui no chat através de outras pessoas. Gostaria de saber como você pretende investigar efeitos da alantoína em células leucêmicas sensíveis e resistentes. Obrigada!

Olá!

Parabéns pelo excelente trabalho!

Gostaria de saber:

- Se a célula c643 expressa a osteopontina-A constitutivamente.

- Que tipo de câncer de tireoide é a c643.

- Em relação a osteopontina, o que ela é? Um hormônio? Possui receptor? Como ela promove seus efeitos?

Abs,

Andrea

Essas nanoformulações já foram testadas previamente? Se sim, como?

Acha que seria valido, avaliar o impacto do tratamento quimioterápico concomitante com o tratamento com MC?

Em sua opinião, o que foi observado no trabalho, pode representar um mecanismo amplo de carcinogênese, ou seria algo restrito apenas ao hepatocarcinoma?

Não seria interessante utilizar outras linhagens com as mesmas mutações, uma vez que a utilização de uma única linha poderia ter um viés biológico “linhagem específico”?

Boa tarde,

Parabéns pelo trabalho e pelos resultados!

Seguem algumas perguntas a titulo de maiores esclarecimentos:

1. No vídeo da sua apresentação, você selecionou a linhagem 888 mel, embora tenha utilizado outras três linhagens (A375, M026 e D10), inclusive também resistentes ao inibidor de BRAF.

Existe algum motivo específico para a seleção dessa linhagem?

2. Poderia falar um pouco mais sobre o tratamento in vivo? Quais animais foram utilizados?

Como foi feita a indução do melanoma nesses animais? E a confirmação do aparecimento do tumor previamente ao tratamento com inibidores de BRAF?

Mais uma vez, parabéns pelo trabalho e pelos resultados.

Att,

Dr Igor Petrone, avaliador.

Olá Danielle, parabéns pelo trabalho!

Fiquei com uma dúvida: como você interpreta a existência dessa população de células em S, mas BrdU-negativas? 

Olá Marllow! Parabéns para você e todos os envolvidos pelo trabalho que estão desenvolvendo. Após ver seu resumo e postar fiquei com algumas dúvidas que gostaria de conversar com você a respeito.

1- Qual foi o principal critério de descarte para partir de um total de 89 trabalhos e chegar em somente 6 adequados para a sua análise?

2- No poster podemos ver que em um dos trabalhos o material analisado foi plasma e não soro. Você acredita que isso poderia gerar alguma diferença nos parâmetros avaliados (colesterol total, HDL, LDL e triglicérides)?

3- Já existe algum estudo associando o uso de fármacos como a sinvastatina na endometriose? Vocês já tem alguma hipótese para explicar como o aumento da lipidemia no sangue leva ao desenvolvimento da endometriose?

Boa tarde! Gostaria de saber se já foi observada alguma alteração de CDK9 em pacientes que apresentam mutações no gene BRCA1?

Parabéns pelo trabalho! Muito interessante. Gostaria de saber se vocês já realizaram outros estudos para entender o mecanismo de ação desses compostos mais promissores. Por que vocês acham que são melhores olhando pra estrutura deles.

Boa tarde.

A autora está no doutorado? Qual o ano?

Trabalho é muito interessante e bem desenvolvido. Parabéns ao grupo!

Quais os próximos passos? Como seu trabalho ajudará na imunoterapia?

Boa tarde, sou Flavia Vasconcelos e irei avaliar seu pôster.

Por favor, responda algumas questões

1- os dibutilfosfato são utilizados na clínica para o tratamento de alguma doença?

2- Os compostos foram dissolvidos em qual reagente? DMSO ou diretamente em meio de cultura?

3- Qualo racional para a utilização de dois ensaios para cálculo de IC50?

4- Não foi explicado o porquê da utilização apenas 2 dos 5 compostos.

5- Sugiro testar os compostos em células não neoplásicas de mama e em células de sangue periférico de indivíduos saudáveis a fim de avaliar a toxicidade dos compostos 

6- Acho que vocês poderiam, além de investigar o efeito dos compostos, investigar o mecanismo de ação. Talvez seja interessante não descartar a ausência de efeito dos compostos na MDA (tripplo negativa)

7- qual a sua participação em todos os experimentos?

Olá Amanda, parabéns pelo trabalho! Ótimo poster, muito bem construído.

Algumas dúvidas:

1) Vc não viu a formação de núcleos picnóticos nem de geração de ROS, mas viu ativação de Caspase 3. Qual deve ser o mecanismo molecular envolvido na perda de viabilidade/morte? O que vc pretende avaliar em seguida?

2) Gostaria de saber mais um pouco de como foi o processo de criação dessas 9 moléculas testadas, se há algo descrito para moléculas desta classe em termos de toxicidade, mesmo que em outros modelos. Além disso, vocês já tem alguma ideia do mecanismo de ação dessas moléculas sintéticas que vocês produziram?

3) Qual a diferença entre as linhagens SCC4, 9 e 25? Que linhagens de fibroblastos foi utilizada? São imortalizados?

Olá Caroline, boa tarde!

Primeiramente, parabéns pelo trabalho e pela clareza da sua apresentação no vídeo! Gostaria de aproveitar a oportunidade para entender melhor alguns pontos.

Esse trabalho se propõe a buscar novos candidatos a fármacos para o tratamento do adenocarcinoma de mama, com menos efeitos colaterais ou reações adversas. Foram testados uma série de “"dibutylfsphofonates” e também seus derivados em modelos 2D e 3D de cultura de células MCF-7 e MDA-MB231. Na linhagem MCF-7, os cinco compostos mostraram significativa atividade citotóxica e todos os experimentos foram realizados exclusivamente com esta linha celular.

1 – Gostaria de pedir, por gentileza, que você comente qual o seu envolvimento nos experimentos realizados.

2 – Gostei muito do desenho experimental de vocês. A cultura tridimensional realmente se mostra um dos melhores modelos in vitro para mimetizar o microambiente tumoral. Além disso, comparações de culturas de esferoides com culturas em monocamadas demonstram diferenças funcionais em diferentes linhagens celulares tumorais. Vocês chegaram a avaliar os efeitos citotóxicos dos “dibutylfsphofonates” sobre a linhagem celular MDA-MB231 (triplo negativa) em modelo 3D?

ainda na metodologia, gostaria que você falasse do motivo da escolha do zebrafish como modelo in vivo para seu projeto. Quais seriam as vantagens e desvantagens desse modelo? claro que seu composto é de origem marinha, mas o objetivo é testar em tumor humano, por isso a minha pergunta sobre o modelo.

Em primeiro lugar, parabéns pelo trabalho! Agora vamos às perguntas: vc saberia me dizer se a OSPN4 e 5 foi descrita em linhagens celulares de carcinoma de esôfago ou em tecido tumoral? E de que subtipo histológico? Vc não acha que, como essas isoformas foram descritas em carcinoma de esôfago, teria sido interessante comparar o nível de expressão delas tb nesses tumores, além dos outros que vc já avaliou? Existe uma expressão diferencial das variantes de osteopontina, de acordo com o subtipo histológico dos tumores? Por exemplo: alguma das isoformas é mais expressa em adenocarcinomas...? vc disse que as isoformas OPN a,b e c são mais bem caracterizadas em relação a sua funcionalidade: quais são as diferenças funcionais entre elas? Qual vc acha que é o impacto do aumento da expressão dessas isoformas em tecidos tumorais quando comparados a tecidos não-tumorais? Como vc poderia avaliar o papel da OPN4 e 5 para o desenvolvimento e/ou progressão tumoral? Por fim, esse trabalho já está finalizado ou vc tem alguma perspectiva de continuação?

Os autores esperavam encontrar esses resultados?

Boa tarde Araci,

Muito interessante o seu modelo de estudo! Você pretende avaliar marcadores inflamatórios? Quais? Parabéns pelo trabalho!

Olá, Beatriz!

Parabéns pelo trabalho! Muito interessante!

Como as concentrações do extrato e das subfrações foram determinadas?

Considerando que a concentração das sufrações avaliadas são bem discrepantes, vocês acreditam que alguma delas tenha maior potencial de vir a ser usada em tratamentos?

Foi feito algum ensaio de toxicidade do extrato e das subfrações em células não tumorais?

Vocês pretendem quantificar a expressão de ATG-12 para comparar melhor o efeito do extrato?  Vocês vão avaliar o efeito das subfrações  na expressão de ATG-12?

 

Parabéns pelo trabalho,

Como o LASSBio-2208 inibe proteinas diferentes? é um domínio comum entre elas?

Sabe se tem outras proteínas qua são inibidas com esse composto?

Por que em 48h não mais tem efeito?

No poster aparace outro blot, sobre STAT3-P, e de IL-6 que não consta no resumo? Por que da inclusão desses dados?

Obrigado

A pequena diferença de expressão (não significativa) entre as isoformas de osteopontina, justificaria a escolha da isoforma C?

Como vc poderia explicar o aumento na proliferação das células silenciadas para OPNC, de maneira concomitante com a diminuição da viabilidade?

Pensaria em avaliar os efeitos da superexpressão de OPNC, a fim de validar os achados?

Como poderia incrementar o trabalho em nível translacional e também em nível funcional?

Acha que seria interessante utilizar outras linhagens de B-ALL sem a fusão KMT2A-AFF1 como controle?

Boa tarde, Lucas. Parabéns pelo trabalho. Achei muito interessante.

Algumas dúvidas:
1) Qual a diferença entre as linhagens SCC4, 9 e 25? Elas tem a mesma mutação? São derivadas de pacientes com doenças do mesmo grau?

2) Qual a importância de quantificar fenóis e flavonóides?

3) Qual a sua hipótese para explicar essa aparente contradição entre o fato do ácido azelaico ser o principal candidato a mediar o efeito citotóxico (por ser a única molécula presente unicamente em um dos extratos), mas ao mesmo tempo, ao ser purificada, apresentou IC50 maior?

4) Era esperado que o PBS causasse hemólise e a carboplatina não?

Em primeiro lugar, parabéns pelo trabalho! Agora vamos às perguntas: Por que vocês não avaliaram a reversibilidade dos compostos, bem como o consumo de glicose, produção de lactato e conteúdo de ATP na MCF10A? Se os efeitos observados não forem específicos para a linhagem tumoral, qual o impacto para o uso desse composto na terapia antitumoral? Seria importante avaliar os mesmos parâmetros em outras linhagens celulares (de mama ou outros tumores) para investigar se os efeitos observados são linhagem/tumor específico? O que já é sabido sobre a ativação da autofagia nos tumores de mama? Pergunto isso pq a autofagia tem um papel dual em tumores, de uma maneira geral, sendo a ativação desse processo bastante associada à progressão tumoral, invasão, resistência à terapia...: por que aqui nos seus modelos você acha que a autofagia está disparando a morte celular autofágica, desempenhando, assim, um papel anti-tumoral? Vc avaliou outros marcadores autofágicos (ou mesmo as taxas de autofagia) além da conversão de LC3B? Vocês tentaram modular a autofagia (usando inibidores ou indutores)? Por que vocês concluíram que a autofagia é o principal mecanismo de morte celular nos modelos utilizados? Avaliaram moléculas envolvidas no processo apoptótico tb? Por que esse composto induz autofagia e apoptose: qual seria a relação funcional entre esses dois processos?

Apesar do screening inicial ter sido feito com várias linhagens, nas análises funcionais vcs utilizaram apenas uma única linhagem. Logo, em sua visão os resultados não poderiam ser considerados “linhagem específico”?

Acha que seria interessante realizar a análise da liberação de LDH como uma forma de avaliar o potencial citotóxico da droga, inclusive o processo de necrose, que foi demonstrado por um ensaio não específico (morfológico)?

A indução de necrose e não apoptose, poderia ser um fator negativo associado ao uso do MB10?

Acha que seria interessante realizar a análise da liberação de LDH como uma forma de avaliar o potencial citotóxico da droga, inclusive o processo de necrose, que foi demonstrado por um ensaio não específico (morfológico)?

A indução de necrose e não apoptose, poderia ser um fator negativo associado ao uso do MB10?

Na Figura 4, você avaliou o potencial de membrana mitocondrial. Primeiramente, o que é esse parâmetro? Por que ele é importante? 

Outra dúvida: as imagens de microscopia mostram "fluoresência verde" e "fluorescência vermelha". isso não está claro. O que está sendo marcado? Quais são as sondas vermelhas e verdes?

Olá!

Parabéns pelo excelente trabalho!

Porém, fiquei cm algumas dúvidas:

O que é a via HBP e qual é a sua função?

Qual é a importância de se manter a biossíntese de UDP-GlcNAc na célula de câncer de pulmão?

Você observou que o TGF-beta aumenta a expressão proteica da ATP citrato liase, seria importante avaliar também a atividade da enzima?

Abs,

Andrea

O trabalho indica que ZNF teria associação com a invasão e sobrevida, no entanto pacientes com baixos níveis de ZNF apresentaram uma alta expressão de VCAM1, como vc poderia explicar isso?

Em função do impacto na sobrevida associado com a expressão de ZNF429, não teria sido mais interessante explorar a via relacionada com a degradação da MEC?

Como pensa em aprofundar os achados atuais?

Boa tarde.

Trabalho é interessante.

Quando a autora estrou no doutorado?

Chegaram a pensar em  estratificar um subgrupo desses pra ver se conseguem encontrar algum subgrupo que se beneficie da radio?

Na conclusão disseram q a combinação  com radio diminui o volume do tumor mas isso não está nos resultados. Os autores analisaram o volume? Se sim, seria melhor ter colocado no pôster.

Quais os próximos passos?

Boa tarde, Anna!
Parabéns pelo trabalho! Gostaria de saber qual foi o inibidor de caspase que usou no seu ensaio.

Obrigada

Boa tarde Thayana,

Parabéns pelo seu trabalho! Você pretende investigar se esses RNAs linc quando up-regulados tem alguma relação com uma maior ativação de STATs 3 e 5 e Jak 2? E se isso se correlaciona com um pior prognóstico? Já existem dados sobre isso na literatura?

Uma outra dúvida. Há alguma explicação biológica, ou rota biológica, que favorece a diminuição do tumor no fígado e médula óssea? 

Olá Araci!

Parabéns pelo trabalho e pela exposição dos seus dados no vídeo.

Quais são os principais mecanismos já conhecidos associados a este risco aumentado para o tromboembolismo venoso em pacientes com câncer?

Vocês pretendem avaliar se fatores de risco do hospedeiro já bem conhecidos podem ser avaliados no modelo de estudo que estão desenvolvendo? Se sim, como isso poderia ser feito?

Obrigada

Mariana Emerenciano

https://www.inca.gov.br/pesquisa/pesquisa-clinica/medicina-molecular/estudo-molecular-do-cancer

Outra pergunta, gostaria de saber se vocês pensam em desenvolver algum protótipo para contagem das células, aplicando o modelo matemático 4, que foi o mais adequado

olá! gostaria de perguntar se vocês pretendem aumentar o número de amostrar de mama sem tumor, para compor a estatística do trabalho.

obrigada!

Boa tarde, João Marcos!

Parabéns pelo trabalho e pelo vídeo apresentando seus resultados.
 
Se seus dados vierem a comprovar que TP53 contribui para o 'surgimento' de células tonco tumorais LGR5 positivas, qual seria uma possibilidade terapêutica para estes pacientes?
 
Este potencial papel de TP53 como indutor para o aparecimento/resistência de células tronco tumorais já foi descrito em outros tipos de cânceres? Se sim, quais?
 
Muito obrigada e sucesso com a finalização do trabalho.

Abraços

Mariana Emerenciano

https://www.inca.gov.br/pesquisa/pesquisa-clinica/medicina-molecular/estudo-molecular-do-cancer

Boa tarde Juliana!

Parabéns pelo seu trabalho e apresentação dos seus dados no vídeo.

Gostaria de saber quais são especificamente os resultados clínicos negativos frequentemente associados com a expressão de EGFR? Sobrevida livre de evento, sobrevida global, risco de recorrência?

A correlação positiva entre EGFR x PAFR e EGFR x LPCAT2 que vocês encontraram nas amostras de pacientes com câncer cervical é independente de fatores clínicos ou demográficos das pacientes?

Obrigada e desejo sucesso na conclusão do trabalho!

Abraços

Mariana Emerenciano

https://www.inca.gov.br/pesquisa/pesquisa-clinica/medicina-molecular/estudo-molecular-do-cancer