Excelente trabalho , digno de nota e divulgação ! 

Saudações ,

Professor Wilson Araújo da Silva Jr

Olá Isadora, parabéns a você e todo o laboratório pelo trabalho bem interessante. Tenho particular interesse nas proteínas S100 e anexinas, e achei muito interessante o achado da proteína S100A4 diferencialmente presente e associada com a indução da transição epitélio mesenquimal. Gostaria de fazer duas perguntas. Primeiro se vocês encontraram expressão diferencial de alguma das proteínas da família das anexinas. E também quais seriam os próximos passos planejados para esse trabalho?

O que é usado dessa planta como terapia anticancer é um extrato e dele os principais componentes (ou os mais conhecidos) são as lectinas e viscotoxinas, correto? Qual a diferença dos dois processamentos usados? Existe diferença da atividade antitumoral das duas espécies (P. sylvestris e M. domestica)?

Oi Isadora,

Tenho duas duvidas:

1)Tu tentaste realizar experimentos de marcacao como citometria de fluxo ou mesmo imunohistoquimica para avaliar a expressao de vementina e TGF-beta em EVs?

2) Alem de caderina, como ficou a expressao de proteinas da classse de integrinas, ja que sao moleculas relacionadas a metástase e angiogênese, por exemplo? Tu chegaste a identificar estas proteinas em EVs ou mesmo no CM?

Olá fiquei com dúvidas quanto a confluência celular? As células estavam confluêntes durante o ensaio? Testou diferentes níveis de confluência?

Poderia explicar melhor o obese SAT and obese VAT? qual a diferença?

Qual foi o experimento (metodo) de viabilidade celular usado?

Por que selecionou a irradiacao de 35 e de 70 joules/cm2?

Tentou realizar aumento gradual (ou um gradiente) da intensidade de irradiacao do laser ate chegar em 70 J/cm2?

Primeiro, parabéns pelo trabalho! Prefiro fazer todas as perguntas em um único tópico, assim facilitamos o processo. 

1 - Há quanto tempo você vem desenvolvendo esse projeto de pesquisa?

2 - Ficou clara que a escolha da linhagem BT474 se deu por conta da presença de HER-2, porém sabemos que outros mecanismos moleculares podem estar ou não associados à resposta a drogas alvo. Você saberia dizer se esta linhagem apresenta outras moléculas que auxiliariam ou dificultariam a resposta ao Trastuzumab (por exemplo, p53 selvagem , PTEN mutado, etc)?

3 - Dentre as vias alteradas nas análises proteômicas os autores discutiram que as vias relacionadas à adesão celular estão sendo moduladas pelo tratamento. Mas não ficou claro se elas estariam sendo positiva ou negativamente reguladas. O que estaria acontecendo com a adesão celular, no caso da linhagem BT474, após o tratamento com o Trastuzumab? E vocês pensam em avançar nos estudos em outras vias também moduladas pelo tratamento ou focariam apenas na adesão celular?

Qual a concentração de Trastuzumabe utilizada no tratamento das linhagens nos experimentos de análise de integrina B1? Qual o seu efeito na viabilidade dessas linhagens? E qual seria a concentração utilizada na clínica?

A linhagem bt-474 é HER-2 positiva? Qual é a expressão do receptor comparado com outras linhagens mamárias?

Gostaria de saber se sendo obtido de pacientes de cirurgias plásticas também não teriam um certo nível de sobrepeso? E neste caso apresentarem já um nível de citocinas pró-inflamatórias?

Quais serão os próximos passos uma vez descoberta as proteínas alteradas com transtuzumab?

Olá Thais,

Boa Tarde! Parabéns pelo seu trabalho. Fiquei com algumas dúvidas.

1- Há quanto tempo você está neste projeto?

2- Qual a concentração proteica utilizada para o ensaio de SDS-Page?

3- Vocês pretendem validar a expressão de alguma proteína identificada na análise in silico?

4 - Quais experimentos vocês pretendem fazer para confirmar o perfil mais migratório/metastático da linhagem resistente? 

Obrigada.

Paloma Souza

Olá! Gostaria de saber quais experimentos funcionais vocês estão realizando ou pretende realizar para verificar o efeito visto nestas células normais após o uso do lasers, já que estas estão com um perfil similar da tumoral..? E vocês tem indícios do que está permitindo isso, quais vias ou processos, ou ainda é necessário maiores investigações? Obrigada, bom trabalho!