OPTIMIZATION OF THE SEED-TRAIN PROCESS USING E. coli DH10B FOR PLASMID DNA PRODUCTION

Os avanços na tecnologia do DNA recombinante criaram novos conceitos de terapia, como as vacinas de DNA e a terapia gênica. Devido a isso, o número de estudos na área aumentou a demanda por DNA plasmidial (pDNA) que atenda aos requisitos das agências reguladoras. Nesse contexto, esse trabalho se propôs a encontrar uma metodologia eficiente de propagação celular a partir da utilização da linhagem de E. coli DH10B. O método que se mostrou mais interessante foi o cultivo iniciado com bactéria armazenada em banco com meio M9 suplementado com leucina, seguido de propagação celular realizada em meio LBS e, finalmente, cultivo em frasco Erlenmeyer de 500 mL contendo novamente o meio M9 suplementado no volume de 100mL. Nessas condições, a cepa contendo o pDNA não apresentou parâmetros cinéticos distintos daqueles obtidos para a cepa sem pDNA, indicando que o fardo metabólico da presença plasmidial não afetou o crescimento das células. A produtividade de DNA plasmidial ao final do cultivo foi baixa, 14,0 ± 2,81 μg/L/h, indicando restrições nutricionais. Dada a necessidade de utilização industrial de meios definidos, espera-se que nos estudos futuros seja possível identificar e correlacionar restrições nutricionais a fenômenos fisiológicos e metabólicos críticos na produção de pDNA.