Desenvolvimento de Método de Diagnóstico Molecular para o Diagnóstico deTrichinella spiralis em Carnes de Suínos

Introdução: A Trichinelose é uma zoonose transmitida pelo consumo de carnes suínas cruas ou malcozidas contaminadas com larvas de Trichinella spiralis. A detecção de larvas de T. spiralis em carcaças é feita pelo método de digestão enzimática de fragmentos do diafragma. Esse método é aplicado na rotina da inspeção de carnes, porém apresenta limitações na sensibilidade e não permite identificar diferentes espécies de Trichinella spp. Até o presente, não há relatos sobre o diagnóstico de Trichinella spp no Brasil, mas devido às exigências sanitárias internacionais, é necessário desenvolver métodos de diagnósticos mais sensíveis. Nesse contexto, desenvolvemos um teste baseado na reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar diferentes espécies de Trichinella spp. em amostras de diafragma suíno. Métodos: Foram desenhados primers para amplificar cinco genótipos de Trichinella spp. e um gene sintético contendo a sequência complementar a todos os primers, o qual foi clonado em um plasmídeo (pCR 2.1), amplificado em Escherichia coli TOP10 e usado como controle da PCR. Amostras de fragmentos de diafragma suíno foram obtidas de um abatedouro, analisadas pelo método de digestão enzimática e, após extração do DNA, submetidas também à PCR. Resultados: As alíquotas resultantes da amplificação pela PCR foram analisadas por eletroforese em gel de ágar e os fragmentos de DNA resultantes correspondem a cada espécie de Trichinella spp. A sensibilidade da PCR com o gene sintético foi equivalente ao DNA presente em uma larva do parasita, superior ao método clássico de digestão que detecta 3 larvas por 100 g de tecido. Todas as amostras obtidas de suínos foram negativas ao teste. Conclusões: A PCR foi capaz de detectar fragmentos de DNA equivalente em tamanho ao esperado a partir de larvas de Trichinella spp e a sensibilidade foi equivalente a uma larva de T.spiralis