Confirmação da Transformação de Plantas do Porta-enxerto Citrumelo Swingle com Genes que Codificam Peptídeos Antimicrobianos

Introdução: A citricultura tem grande importância para o agronegócio brasileiro. Entretanto, o setor enfrenta diversos problemas causados por bactérias fitopatogênicas, como o cancro cítrico, a clorose variegada dos citros (CVC) e o Huanglongbing (HLB). Face às restrições para o emprego do melhoramento genético convencional, a transformação de plantas cítricas utilizando técnicas biotecnológicas pode contribuir para o desenvolvimento de cultivares com resistência a essas e outras doenças microbianas. Os objetivos deste estudo foram confirmar a transformação de plantas do porta-enxerto citrumelo Swingle (Citrus paradisi Macf. x Poncirus trifoliata L. Raf.) via Agrobacterium tumefasciens com genes que codificam os peptídeos antimicrobianos Sarcotoxina IA (stx-IA), isolado da larva da mosca Sarcophaga peregrina, e Atacina A (attA), isolado da hemolinfa de Trichoplusia ni, e determinar a expressão desses genes nas plantas transgênicas. Métodos: O vetor binário pST10 foi utilizado para transformação com o gene stx-IA possuindo o cDNA da sarcotoxina-IA ligado a uma sequência do peptídeo sinal de tabaco PR1a, dois “enhancers” e uma sequência ômega do TMV sob controle do promotor CaMV 35S. Já para o gene attA foi utilizado o vetor também binário pCattA 2300. O gene attA está sob controle do promotor e terminador CaMV 35S, duplicado. A presença dos genes stx-IA e attA no genoma das plantas cítricas foi determinada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando iniciadores específicos. A transcrição dos genes antimicrobianos também foi determinada pela técnica de PCR, utilizando cDNA sintetizado a partir de RNA total extraído das plantas cítricas. Resultados: A presença e a expressão do gene stx-IA foi confirmada em dez eventos de citrumelo Swingle. Por outro lado, a presença do gene attA não foi confirmada em nenhum dos eventos analisados. Conclusões: Desta maneira, plantas do porta-enxerto citrumelo Swingle são passíveis de serem transformadas via A. tumefasciens e expressarem genes que codificam peptídeos antimicrobianos.