Teste de expressão e modelagem por homologia da Leucemia/Linfoma de células T 1B de Homo sapiens

A proteína Leucemia/Linfoma de células T 1B (TCL1B) de Homo sapiens é considerada um potencial alvo terapêutico para doenças neoplásicas humanas, localizada no cromossomo 14 é ativada por translocações cromossômicas em células T imaturas, células B imaturas e virgens. Em interação com a proteína quinase B (Akt) aumenta a sua atividade quinase, e em contato com células T causa leucemia. O objetivo deste trabalho é o estudo teórico da proteína TCL1B por meio de um modelo por homologia e também produzir a proteína recombinante de maneira heteróloga em Eschericha coli BL21-DE3. Para a construção do modelo foram selecionadas estruturas depositadas no PDB com a utilização da ferramenta BLAST para escolher um molde com maior identidade. Foi escolhida a seguinte estrutura molde, de código PDB: 1JNP, a qual apresenta 33,61% de identidade com a proteína TCL1B. 15 modelos TCL1B foram obtidos com o programa MODELLER. O modelo escolhido apresentou DOPE normalizado igual a -1,426, sendo modificados os ângulos phi e psi do aminoácido GLU125 em comparação com outro modelo, atualizando o DOPE igual a -1,304 e o gráfico de Ramachandran gerado pelo programa PROCHECK indicou que 87.2% dos aminoácidos se encontram nas regiões mais favoráveis e 12.8% em regiões adicionalmente permitidas, não tendo nenhum em regiões generosamente permitidas e em regiões desfavoráveis. O modelo apresenta 8 Folhas β antiparalelas. No teste de expressão heteróloga, primeiramente realizou-se a transformação bacteriana por eletroporação utilizando o vetor pET-15b. Os clones obtidos com resistência ao antibiótico ampicilina foram selecionados por meio do crescimento bacteriano, enquanto as não transformadas foram utilizadas como controle negativo. Porém, não foi testada a expressão da proteína TCL1B, nesse sentido é necessária à continuação do projeto, para que se consiga a expressão e futuramente a estrutura cristalográfica da TCL1B.