Produção de Quinolonas Sinalizadoras do Quorum sensing de Pseudomonas aeruginosa

Introdução: A Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa aeróbica que se utiliza de homoserino lactonas e quinolonas sinalizadoras para realizar a comunicação célula-a-célula, também chamada de quorum sensing. Esse mecanismo faz uma regulação coordenada da expressão de genes dependente da densidade populacional, através da produção, transporte e reconhecimento destas moléculas sinalizadoras. As principais quinolonas sinalizadoras do quorum sensing de P. aeruginosa são a 4-hidroxi-2-heptil-quinolona (HHQ) e a 2-heptil-3,4-hidroxi-quinolona, também conhecida como PQS. Além dos efeitos na regulação da expressão gênica da bactéria as quinolonas apresentam também efeitos na modulação da resposta imune no hospedeiro, sendo possíveis alvos para desenvolvimento de novas drogas anti-inflamatórias. Neste contexto, o objetivo principal deste estudo foi a obtenção de quinolonas do quorum sensing de P. aeruginosa através de cultivos submersos da cepa PA01. Métodos: Foram realizados cultivos submersos em frascos Erlenmeyers de 250 mL contendo 100 mL de meio de sais (contendo por litro: 3,0 g KH2PO4; 7,0 g K2HPO4; 0,2 g MgSO4.7H2O e 1,0 g (NH4)2SO4) acrescentados de glicerol (3% v/v). Os cultivos foram incubados à 37 °C /200 rpm por 3, 6 e 9 dias, interrompidos nos dias pré-determinados e centrifugados a 4500 rpm por 20 minutos. Os sobrenadantes livres de células foram extraídos duas vezes com acetato de etila acidificado [ácido acético glacial 0,01% (v/v)] (1:1) e a fase orgânica, contendo as quinolonas, concentrada por evaporação à 60 °C e pressão negativa. As frações obtidas de cada dia de cultivo foram submetidas à análise por cromatografia de camada delgada analítica, a fim de revelar a presença de quinolonas sinalizadoras. Resultados: O emprego dos métodos de cultivo e extração, acima descritos, revelou a presença da molécula 2-heptil-3,4-hidroxi-quinolona (PQS), confirmada por comparação dos índices de retenção da amostra com o padrão de PQS por cromatografia de camada delgada. Houve obtenção de PQS com três e nove dias de cultivo. Conclusões: O presente trabalho mostrou que é possível se obter PQS por cultivos de PAO1, adicionalmente, pôde-se confirmar que nove dias de cultivo foi o melhor tempo para obtenção de PQS com maior produção relativa e pureza. Mais estudos serão necessários para se obter PQS em concentrações e pureza suficientes para a avaliação do potencial destes compostos na resposta imune de mamíferos.