Isolamento de Bactérias do Ácido Acético e Capacidade de Produção de Exopolissacarídeos

Introdução: As bactérias do ácido acético (BAA), além de serem utilizadas comercialmente na produção de vinagres e outros alimentos fermentados, também têm demonstrado a capacidade de produzir grandes quantidades de exopolissacarídeos (EPS). EPS são biopolímeros que apresentam extensivo potencial de aplicação nas indústrias de alimentos, farmacêuticas e de cosméticos. Tendo isso em vista, o presente trabalho teve como objetivo isolar linhagens de BAA e verificar a capacidade de produção de EPS, utilizando como substrato, a sacarose. Métodos: Para tal, amostras de uvas foram inoculadas em meio de enriquecimento para posteriormente seguir-se para o isolamento e purificação dos microrganismos. Os isolados foram então submetidos à etapa de identificação fenotípica para diferenciação da família Acetobacteriaceae (teste de Gram, teste de capacidade de oxidação do etanol a ácido acético/ capacidade de oxidação de ácido acético a CO2 e H2O; teste de oxidação de lactato e acetato; teste de produção de catalase; teste de produção de ácido a partir de glicose; teste de produção de dihidroxiacetona (DHA) a partir de glicerol; teste de produção de pigmento marrom; teste de produção de celulose) incluindo-se também o teste de produção de substância mucoide (EPS) a partir de placas contendo sacarose. Os isolados Gram-negativos pertencentes a esta família e que demonstraram forte atividade de produção de EPS(+++) a partir da sacarose foram posteriormente submetidos a fermentações em frascos Erlenmeyer. As fermentações foram realizadas em meio Hestrin-Schramm modificado (50 g.L-1 sacarose), mantidas a 30 ºC sob agitação (150 rpm) durante 48 horas. Após incubação, as células foram removidas por centrifugação (5000 rpm/15 minutos), sendo o sobrenadante precipitado com etanol resfriado (3:1, v/v) e mantido por dois dias sob refrigeração a 4 °C. O EPS foi recuperado por centrifugação, ressuspendido em água ultrapura e finalmente liofilizado e pesado para o cálculo de produtividade em peso seco (g.L-1). Resultados: O procedimento de isolamento forneceu 8 linhagens (BM1, BM11, BM13, MM2, MM4, MM2,5, M3,5-3 e M3,5-6) de bastonetes Gram-negativos que apresentaram-se como EPS(+++), sendo que todas mostraram habilidade em oxidar etanol a ácido acético mas não superoxidar o ácido a CO2 e H2O, oxidação de lactato a acetato negativo, catalase negativo, produção de ácido a partir da glicose e DHA a partir de glicerol, celulose negativo e quanto a produção de pigmento marrom, somente o isolado MM2,5 mostrou-se positivo para tal teste. A maior produção (p<0,05) de EPS foi obtida pelo isolado BM11 (21,58 ± 0,76 g.L-1), seguida por M3,5-6 (19,44 ± 0,30 g.L-1) e M3,5-3 (18,91 ± 0,29 g.L-1). Produções intermediárias foram apresentadas por MM4 (13,86 ± 0,48 g.L-1), BM1 (13,06 ± 0,70 g.L-1) e MM2 (11,64 ± 0,76 g.L-1), enquanto as menores foram obtidas pelas cepas BM13 (8,06 ± 0,63 g.L-1) e MM2,5 (6,31 ± 0,01 g.L-1). Conclusões: Com base na literatura, os resultados mostraram que as linhagens isoladas possuem grande capacidade de produção de EPS a partir da sacarose, uma vez que as condições de fermentação ainda não foram otimizadas. Além disso, posterior caracterização dos polissacarídeos poderá fornecer informações essenciais para o direcionamento de sua aplicação tecnológica.