VII SIMPÓSIO DE BIOQUÍMICA E BIOTECNOLOGIA

Introdução: O ditiotreitol (DTT) é utilizado em algumas análises devido a sua capacidade antioxidante e por conferir estabilidade enzimática ao reduzir grupos tióis proteicos. Experimentos anteriores determinaram que o DTT é um antioxidante e fotoquimioprotetor por reduzir a morte de fibroblastos L929 induzida por UVA e diminuir o estresse oxidativo. O presente trabalho abordou a influência do DTT na atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), e nos níveis de glutationa reduzida (GSH), que atuam no sistema antioxidante endógeno, comprometido quando as células são expostas a UVA. Métodos: Fibroblastos L929 foram adicionados em microplacas de 6 poços (4x105 células/mL), após 24 h foram tratados com DTT (50 ou 100 µM) por 1 h e irradiados com UVA (20 J/cm2), incubados por 24 h e lisados, centrifugados e os sobrenadantes coletados. O teor de proteínas foi dosado pelo método de Bradford. Para a quantificação de SOD foram misturados em cubeta de quartzo 50 mg de proteína do lisado, 70 µL de pirogalol e completou-se para 1000 µL de tampão tris-HCl/EDTA. A leitura foi realizada em espectrofotômetro a 420 nm por 2 min. Na quantificação de CAT, foram adicionados em cubeta 50 mg de proteína do lisado, 300 µL de peróxido de hidrogênio (H2O2) e completou-se para 1000 µL com tampão fosfato de potássio. A leitura foi efetuada em espectrofotômetro por 10 min a 240 nm. Por fim para a quantificação de GSH, 10 µL dos lisados, 180 µL de tampão fosfato de sódio e 10 µL de o-ftaldialdeído foram adicionados a microplaca preta de 96 poços. Após 15 min fez-se a leitura em fluorímetro a 350/420 nm de excitação/emissão. Resultados: Nos ensaios de SOD e CAT, a radiação UVA diminuiu a atividade das enzimas em 74% e 39%, respectivamente, e reduziu a concentração de GSH em 46% quando comparado ao controle negativo (células não irradiadas e não tratadas). Ambas as concentrações de DTT melhoraram a atividade de SOD comparado as células irradiadas (100 µM impediu que a atividade fosse reduzida em 68% e 50 µM impediu 61%), podendo o tratamento auxiliar na redução de ânion superóxido. DTT a 100 µM restaurou 28% da atividade de CAT que foi diminuída por UVA, indicando que este pré-tratamento auxilia na redução dos níveis de H2O2. O tratamento com DTT não promoveu alterações nos níveis de GSH. Conclusões: DTT reforçou o sistema antioxidante endógeno dos fibroblastos L929 irradiados com UVA por restaurar parcialmente a atividade enzimática da CAT e SOD, diminuída pela referida irradiação.
Agências de Fomento: CNPq, CAPES, FINEP e PRONEX/Fundação Araucária.

Palavras-chave: ditiotreitol, UVA, sistema antioxidante endógeno.