Avaliação do Inóculo na Produção de Celulase e Xilanase por Trichoderma spp. Utilizando Bagaço de Malte como Substrato

Introdução: A biomassa lignocelulósica agroindustrial compreende uma diversidade de resíduos que são gerados em larga escala durante o processamento de alimentos, bebidas, bicombustíveis entre outros. O bagaço de malte (BM) gerado na indústria cervejeira é produzido na seguinte proporção, para cada 100 L de cerveja são gerados 20 Kg de BM; esse resíduo é um substrato potencial para o cultivo microbiano e ainda pouco explorado. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de hifas como inóculo de Trichoderma spp. na produção de celulase e xilanase em BM. Métodos: O BM foi gentilmente cedido pela Cervejaria Spoller (Londrina-PR). O preparo das hifas foi desenvolvido em Erlenmeyers de 125 mL contendo 25 mL de meio Vogel e glicose 1 % (m/v), inoculados com 108 UFC/mL, incubados a 28 ± 2 °C e 180 rpm por 12, 24 e 36 h. Para o cultivo em BM foram utilizados Erlenmeyers de 125 mL contendo 3,5 g deste substrato umedecido com meio de Vogel acrescido e glicose 1 % (m/v), inoculados com 1 mL de suspensão de hifas crescidas em 12, 24 e 36 h respectivamente e incubados a 28 ± 2 °C por 5 dias. Os cultivos foram interrompidos pela adição de 20 mL de água destilada, homogeneizados, e o sobrenadante centrifugado a 9.000 rpm por 15 min à 4 °C para obtenção do extrato bruto enzimático (EBE) utilizado para determinar pH (inicial e final), açúcar total e redutor, proteínas e a atividade de celulase e xilanase. Resultados: A utilização diferentes suspensões de hifas promoveu um crescimento bastante homogêneo do Trichoderma spp. sobre o BM. Foram produzidas as enzimas celulase e xilanase. A atividade de xilanase foi crescente com o aumento da idade das hifas utilizadas como inóculo sendo 4,02 U/mL (12 h), 4,82 U/mL (24 h) e 7,18 para suspensão de hifas de 36 h esses resultados mostram um aumento de 78 % quando o inóculo com hifas de 36 h de idade foi utilizado. Para a atividade de celulase houve também um aumento proporcional ao aumento da idade das hifas porém com níveis inferiores, 3,48; 4,19 e 4,19 U/mL respectivamente. As concentrações dos açúcares totais, redutores e proteínas totais foram relativamente mantidas independentemente da idade do inóculo, sendo em média 3,79 mg/mL; 1,87 mg/mL e 3,24 mg/mL respectivamente. O material sólido fermentado apresentou peso seco inferior (0,66 g) ao peso do frasco controle (0,76 g) sugerindo consumo do BM durante os cinco dias de cultivo. Conclusões: A idade das hifas utilizadas como inóculo foi importante para a produção de xilanase que apresentou maior atividade quando o inóculo consistiu de hifas com 36 h. Este inóculo também proporcionou a maior atividade de xilanase quando comparada a atividade de celulase indicando que o tipo de inóculo pode ser um parâmetro importante para selecionar a produção de uma hidrolase específica pelo mesmo microrganismo.