INTERACTION WITH SEPTIN TETRAMERS PROMOTES STRUCTURAL ORDERING OF THE CC2 DOMAIN OF THE F-BAR PROTEIN HOF1.

As septinas são proteínas do citoesqueleto que desempenham papéis fundamentais na organização celular e na citocinese, atuando como plataformas para o recrutamento de proteínas reguladoras. Em Saccharomyces cerevisiae , a proteína F-BAR Hof1 é recrutada para o local de divisão celular por meio de sua interação com o complexo de septina. Embora essa interação seja essencial para a localização de Hof1 durante a citocinese, os determinantes moleculares subjacentes a esse processo ainda são pouco compreendidos. Neste trabalho, investigamos a interação entre o fragmento CC2 de Hof1 (resíduos 276–340) e tetrâmeros de septina contendo as subunidades Cdc3 e Cdc10, utilizando abordagens bioquímicas e biofísicas. O tetrâmero de septina recombinante e o fragmento CC2-Hof1 foram expressos heterologamente em Escherichia coli e purificados por cromatografia de afinidade e de exclusão molecular. Ensaios de pull-down utilizando Hof1 marcado com GST como isca demonstraram interação com os construtos Cdc3NGC–Cdc10NGC e Cdc3G–Cdc10NGC; entretanto, nenhuma interação detectável foi observada para o construto Cdc3G–Cdc10Δ1–10, sugerindo que o N-terminal de Cdc10 é importante para o reconhecimento de Hof1. Previsões estruturais geradas com o AlphaFold indicaram que a região CC2 de Hof1 é predominantemente desordenada, mas adota uma conformação mais ordenada após a interação com o tetrâmero de septina. Para validar essa hipótese, experimentos de dicroísmo circular (DC) foram realizados, e os resultados mostraram que o conteúdo de α-hélice de Cdc3NGC–Cdc10NGC aumentou significativamente na presença de CC2-Hof1. Além disso, experimentos de dobramento induzido por TFE demonstraram que CC2-Hof1 exibe uma alta propensão a formar α-hélices, atingindo 29% e 62% de conteúdo helicoidal na presença de 15% e 50% de TFE, respectivamente. Coletivamente, esses resultados sugerem que a interação com septinas promove a ordenação estrutural de Hof1 e identificam uma região dentro de Cdc10 que está envolvida nesse processo.

Este trabalho foi financiado pelo CNPq-PIBIC (2025-1071) e pela FAPESP (2020/02897-1).