A celulose é o recurso renovável mais abundante para uso como substrato na produção de combustíveis e produtos químicos alternativos1. Muitos esforços foram feitos para realizar a hidrólise da celulose, a fim de utilizar os açúcares liberados para a produção de bioetanol. Nesse contexto, foi introduzido o uso de microrganismos para produzir enzimas que realizam essa reação2. Neste estudo, foi realizado isolamento e bioprospecção de fungos do solo de ambiente amazônico capazes de produzir enzimas lignocelulolíticas visando a produção de celulases. Os fungos foram cultivados sob fermentação em estado sólido em frascos Erlenmeyer (125 mL) que continham farelo de trigo (5,0 g) e 10 mL da solução de Mendel. O inóculo foi feito com solução de esporos para a padronização entre todas as linhagens, na concentração de 5.105 esporos/grama de substrato e incubados em estufa por 3 dias a 32 °C. Após o período de crescimento foi realizada a extração das enzimas totais. A solução da enzima bruta foi obtida adicionando 50 mL de tampão acetato de sódio (0,5 M, pH 4,5) ao meio de cultivo. Em seguida o meio foi macerado e triturado e a solução foi agitada vigorosamente durante 60 min. A mistura foi filtrada a vácuo para a retirada da fração sólida. A solução resultante foi usada posteriormente para avaliação da atividade celulolítica do extrato enzimático. No teste de atividade foi utilizada uma tira de papel de filtro (6 cm x 1 cm), que foi enrolada em formato espiral e colocada dentro do tubo de ensaio. Em seguida, adicionou-se 2 mL de tampão citrato (pH 4,8, 50 mM) e 1 mL do extrato enzimático. Os tubos foram então mantidos a 50 ºC por 60 min para que ocorresse a reação. A quantidade de açúcares redutores produzida a partir da hidrólise da celulose do papel de filtro foi medida pelo método DNS. Foram oito as linhagens fúngicas isoladas e estudadas quanto à sua atividade celulolítica, sendo atribuído às mesmas, códigos de identificação. Das oito linhagens isoladas e purificadas, cinco delas foram avaliadas acerca de sua capacidade em produzir enzimas celulases. Observou-se que as linhagens fúngicas estudadas apresentaram valores de atividade que denotam que as mesmas possuem um bom potencial de estudo para a produção de celulases. Dentre as linhagens, podemos destacar A1C2-03, A1C2-05 e A1C2-06, que apresentaram atividades celulolíticas semelhantes e bem promissoras para a continuação da pesquisa, sobretudo na realização de experimentos para determinar as melhores condições de cultivo e reacionais para a obtenção de uma maior atividade. A linhagem A1C2-03 já foi estudada quanto ao melhor período de cultivo em meio sólido contendo farelo de trigo. O cultivo foi realizado por 10 dias, sendo feita a determinação da atividade celulolítica após cada período de 24 h. Observou-se, então, que o melhor dia de crescimento para esta linhagem é no 3º dia após seu inoculo, apresentando uma atividade enzimática celulolítica de 0,5 U.g-1. As próximas etapas deste trabalho envolvem o estudo de outras variáveis de cultivo (pH, temperatura, teor de umidade), o estudo das melhores condições reacionais para as enzimas produzidas por esta linhagem bem como realizar os mesmos experimentos para as linhagens A1C2-05 e A1C2-06.

Referências:
  1-Mohammadi, et al. Renewable and Sustainable Energy Reviews, v. 15, p. 4255-4273, 2011.
2-Souza, et al. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, v. 14, p. 183-188, 2018