Fluorescent nanoprobes based on CdTe quantum dots for bioanalytical applications: determination of cationic protein

Quantum dots (QD) são nanopartículas formadas por semicondutores cuja característica principal é sua alta fluorescência, sendo utilizados como sondas fluorescentes em sistemas variados.1 Visando a determinação de proteínas catiônicas projetamos quantum dots de CdTe funcionalizados com ácido mercaptosuccínico (pKa1 = 3,30 e pKa2 = 4,60). Este ligante foi selecionado pois em pH > 5 a superfície do QD encontra-se preferencialmente com carga negativa e a interação com a proteína é favorecida. Portanto, os QDs produzidos foram aplicados na determinação de protamina, a qual é utilizada na purificação de DNA e neutralização do efeito da heparina.2 O tempo de síntese foi o primeiro parâmetro avaliado para produção das nanosondas fluorescentes (Tabela 1). O método se baseia na supressão da fluorescência do QD (carga negativa) na presença da protamina (proteína catiônica), devido a formação de agregados do nanomaterial (Figura 1). A influência do pH foi avaliada de 5-11, tendo maior sensibilidade para QD60 em pH 5. A melhor performance do método foi alcançada com tampão succinato a 25 mM e concentração do QD60 fixada em 0,25 μM. A força iônica do meio não exerceu influência na sensibilidade até 50 mM (NaCl). O QD60 foi fotoestável por até 2 h com exposição continua de radiação. A faixa linear foi de 0,25 a 2 mg L-1 (50 a 400 nM) com limite de detecção de 0,08 mg L-1 (16 nM). O método foi aplicado em amostras de protamina com recuperações superiores a 90%.