To cite this paper use one of the standards below:
Please log in to watch the video
Log inINTRODUCTION AND OBJECTIVES: Isocitrate Dehydrogenase (IDH) mutations play a significant role in glioma tumorigenesis by disrupting cellular metabolism. It is known that these mutations change the epigenetic landscape and generate cellular heterogeneity, which promotes tumor development. However, it is not yet fully understood how cells bearing mutated-IDH (mtIDH) copies are selected and favored during tumor progression in a pre-malignant context. Lactate is a metabolite generated by Lactate Dehydrogenase (LDH) from pyruvate and ensures cell survival under hypoxic conditions especially in the central nervous system. Interestingly, mtIDH gliomas lack LDH expression, which led us to hypothesize whether such mutations could confer these cells the ability to survive under hypoxic conditions even in the absence of lactate in a pre-malignant context. Therefore, we aim to demonstrate whether: (1) mtIDH gliomas lack LDH expression; (2) knock-down of LDH expression in wild-type (wtIDH) glioma cells and murine astrocytes leads to cell death under hypoxic conditions; (3) ectopic mtIDH expression in LDH-deficient cells can prevent cell death under hypoxia. MATERIAL AND METHODS: To demonstrate LDH expression in wt and mtIDH gliomas, we performed immunohistochemistry (IHC) and WB in patient biopsies. We knocked-down LDH expression in wtIDH glioma cell lines using siRNA or CRISPR. Ectopic mtIDH expression was induced by plasmid transfection in LDH-defficient cells. Cell death was measured by Trypan Blue counting and MTT assay. RESULTS AND CONCLUSION: We identified in a set of 12 patients that mtIDH gliomas lack LDH expression in contrast to wtIDH gliomas, confirmed by IHC and WB. Murine astrocytes and GBM95 cell line that had their LDH expression knocked-down through siRNA died after 24 and 48 hours under hypoxic conditions. This observation suggests that LDH expression and subsequent lactate production are essential for cell survival in hypoxia. We therefore introduced ectopic mtIDH expression into LDH-deficient cells and observed that this expression is sufficient to rescue them from cell death under hypoxic conditions. These preliminary results suggest that mtIDH rescues LDH-deficient cells from cell death under low-oxygen conditions.
Fernanda Costas Casal de Faria
Parabéns pelo trabalho! Tenho algumas perguntas e vou deixá-las no mesmo tópico para facilitar o processo.
1 - Existe diferença na resposta ao tratamento ou à tumorigênese do glioblastoma relacionada a ter ou não a mutação em IDH? Essa mutação (mutIDH) ou a perda de expressão de LDH tem fator prognóstico?
2 - Você citou que na presença da mutIDH e na ausência de LDH a via alternativa com produção de 2-hidroxiglutarato seria acionada? Nos seus modelos vocês chegaram a avaliar se essa via estaria sendo a via de escolha para o resgate celular que vocês observaram? Quais seriam suas hipóteses de como isso estaria ocorrendo?
Danielly Ferraz da Costa
Prezado Luiz Gustavo,
Parabéns ao grupo pelo trabalho. Bem interessantes seus resultados! Duas curiosidades: essa mutação da IDH já foi descrita em outros tumores? A relação inversa entre a presença da mutação da IDH e a expressão de LDH é uma característica específica de gliomas? Vocês fizeram os ensaios de MTT e de exclusão de azul de tripan, mas sabem que via de morte está sendo ativada?
Obrigada!
Atenciosamente,
Danielly Ferraz.
Luiz Gustavo Dubois
Oi Danielly, obrigado pela pergunta. As mutações em IDH também são encontradas em outros tumores, principalmente leucemias. Nós não procuramos a relação entre mtIDH e expressão de LDH nesses tumores, mas seria também muito interessante de ser observado. Também não investigamos ainda qual tipo de morte celular está sendo ativada nessas células, mas são dados que já estamos trabalhando para adquirir.
Danielly Ferraz da Costa
Obrigada pelos esclarecimentos!
With nearly 200,000 papers published, Galoá empowers scholars to share and discover cutting-edge research through our streamlined and accessible academic publishing platform.
Learn more about our products:
This proceedings is identified by a DOI , for use in citations or bibliographic references. Attention: this is not a DOI for the paper and as such cannot be used in Lattes to identify a particular work.
Check the link "How to cite" in the paper's page, to see how to properly cite the paper
Luiz Gustavo Dubois
Olá, Fernanda! Obrigado pelo interesse em nosso trabalho. Existe muita diferença de resposta no tratamento para gliomas mutados e selvagens para IDH. Os tumores mutados para essa enzima são menos agressivos e os pacientes apresentam melhor sobrevida. A produção do 2HG é uma consequência da mutação; ela confere às enzima IDH essa atividade neomórfica, onde deixa de produzir alfa-cetoglutarato e passa a produzir 2HG. O resgate celular provavelmente está acontecendo por essa via, mas ainda não medimos os níveis de produção de 2HG nas células transfectadas com mtIDH.