IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE CANDIDA SPP. EM AMOSTRAS DE PACIENTES COM CÂNCER BUCAL POR MEIO DE PCR - MULTIPLEX

O objetivo da presente pesquisa será identificar Candida spp. em amostras de pacientes diagnosticados com câncer bucal e que frequentam a Clínica Odontológica da Unicesumar ? Centro Universitário Cesumar, Maringá ? PR por meio de PCR ? multiplex. A amostragem será feita através da raspagem da mucosa bucal com swab estéril e descartável, seguida pelo isolamento asséptico em placas de Petri com ágar Saubourand. O DNA para amplificação será extraído pelo método fenol-clorofórmio a partir das culturas das espécies de Candida, em seguida passará pela quantificação por meio da corrida em eletroforese em gel de agarose corado com brometo de etídeo. A identificação ao nível de espécies de Candida será baseada na reação em cadeia da polimerase ? PCR por nested-multiplex com touchdown, na qual o primeiro round utilizará os primers universais ITS1 e ITS4 e o segundo round, caracterizado como espécie ? específico, com os primers para C. albicans (CALB), C. tropicalis (CTR), C. glabrata (CGL), C. krusei (CKR), C. parapsilosis (CPAR). Por fim, será realizada uma corrida eletroforética para a visualização dos resultados da amplificação por PCR e posterior análise estatística. Espera-se, com estes resultados, distinguir as espécies de Candida por meio PCR ? multiplex e verificar a prevalência em pacientes com câncer bucal.