CONSTRUÇÃO DE VETORES DE EXPRESSÃO PARA OS GENES E6 E E7 DE HPV-16 EM ESCHERICHIACOLI

O Papilomavírus humano (HPV) é um vírus de tamanho pequeno, capsídeo icosaédrico, não envelopado e com DNA circular de fita dupla que apresenta tropismo pelo epitélio humano. É reconhecido que a infecção persistente por HPVs de alto risco é a principal causa do câncer de colo uterino. Este trabalho tem como objetivo principal produzir as proteínas E6 e E7 de HPV-16 em Escherichia coli para posteriormente conseguir a possível validação dos efeitos de vacina de DNA no combate ao HPV. A oncoproteína E6 é alvo para imunização genética, principalmente porque induz a formação de um complexo trimérico com a proteína p53, promovendo a degradação proteolítica desta última na célula o que impede suas atividades regulatórias sobre o ciclo celular. Enquanto que a oncoproteína E7 é importante por sua habilidade de se ligar e promover a degradação via proteossomo de membros da família Rb. Os genes de interesse foram clonados e expressos no vetor pAE, este possui significantes vantagens como o tamanho pequeno (2822pb), expressão de cauda de histidina (6XHIS) N-terminal e produz alto número de cópias de plasmídeo por célula. Os genes de interesse E6 e E7 apresentam 489pb e 309pb, respectivamente e, na ocasião, foram adicionados os terminais de restrição XhoI e EcoRI que são sítios de restrição também presentes no vetor pAE, o que permitiu a devida inserção do inserto no vetor. A clonagem foi confirmada por técnica de PCR, e em seguida foi feita indução da expressão por IPTG. Ensaios posteriores serão necessários para confirmar a produção das proteínas.