AVALIAÇÃO DA INTEGRIDADE E QUANTIFICAÇÃO DO DNA DE HÍBRIDOS DE MAMOEIRO

A extração de DNA é uma etapa que requer cuidados e constitui um passo importante para as análises de biologia molecular. A integridade da amostra de DNA pode ser influenciada durante o processo de extração, estando suscetíveis a efeitos de agentes físicos e químicos. Neste sentido, a realização de testes que identifique a
objetivo deste trabalho foi analisar a integridade e quantificar as amostras do DNA de híbridos, provenientes do programa de melhoramento de plantas de mamoeiro da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF), a fim de verificar a adequação das amostras para obtenção de fingerprints. Para a extração do DNA foram coletadas folhas jovens de mudas com uma semana de idade, de dez híbridos de mamoeiro sob avaliação (UC30, UC31, UC47, UC53, UC54, UC57, UC59, UC72, UC32, UC38) e três híbridos comerciais (UC10, HB15 e Candy), selecionados com base no padrão de frutos Formosa, Solo e Intermediário, respectivamente. A extração do DNA genômico dos 13 híbridos foi realizada no Setor de Marcadores de DNA no Laboratório de Melhoramento Genético Vegetal da UENF, em Campos dos Goytacazes – RJ e seguiu o protocolo descrito por Doyle & Doyle. A ea
quantificação do DNA das amostras foi realizada
ng/μl. A
qualidade do DNA e quantidades satisfatórias, permite um melhor
aproveitamento de técnicas moleculares que serão utilizadas após a extração. O
integridade do DNA foi verificada em eletroforese de gel de agarose 1% fotografada sob luz UV
utilizando o espectrofotômetro NanoDrop 2000, com
o rendimento determinado por medições da absorbância a 260, 280 e 230nm e a pureza foi
determinada pela razão de absorbâncias 260/280 e 260/230
mostrou bandas de DNA genômico bem definidas e de elevada massa molecular, indicando a
.
A eletroforese em gel de agarose
integridade do DNA.
As concentrações de DNA das amostras variaram de 101,9 a 2525,9
razão das absorbâncias A260/A280nm das amostras de DNA dos híbridos avaliados variaram de 1,85
a 1,93nm, demonstrando um elevado grau de pureza quanto a contaminação por proteína
.
A razão de
absorbâncias entre A260/A230 quando apresenta valores inferiores a 1,8nm são indicativos de quantidades significativas de contaminação por sais, polissacarídeos e fenol. No estudo, a razão A260/A230 das amostras variaram de 1,69 a 2,24nm, indicando que apenas a testemunha HB15, apresentou indícios de contaminação, sendo necessário submeter essa amostra a procedimentos de limpeza para melhoria da qualidade do DNA extraído. Os resultados permitiram concluir que as amostras apresentam qualidade e quantidade satisfatória podendo ser amplamente utilizadas para as
aplicações das técnicas moleculares para obtenção de fingerprint.