Análise do Papel da quitinase e quitina na morfogênese das armadilhas e na interação Duddingtonia flagrans com nematoide.

As nematodioses gastrointestinais são limitantes a criação dos animais de produção em todo o
mundo. Tradicionalmente, anti-helmínticos são usados para o controle destes parasitos. Porém, a
resistência anti-helmíntica, resíduos dos compostos químicos nos alimentos e a ecotoxicidade de
alguns compostos impulsionam a busca de alternativas a este controle tradicional. Fungos
nematófagos predadores estão entre os agentes biológicos investigados e recentemente
comercializados para o controle das fases de vida livre dos nematoides gastrintestinais. Estes
fungos utilizam estruturas especiais para capturar e infectar os nematoides. A combinação da
atividade mecanica e enzimas hidrolíticas são sugeridas como participantes da penetraçao da
cutícula. Pouco se conhece sobre o papel da quitinase em fungos nematófagos em especial em
Duddingtonia flagrans. Assim, o presente trabalho visa determinar a atividade predatória de D.
flagrans em larvas infectantes (L3) de nematoides gastrintestinais de ovinos e Panagrellus spp.
usando inibidor de quitinase bem como determinar a atividade de quitinase usando substrato
fluorogênico. Para tal, inibidor de quitinase (60 mg/ mL diflubenzuron) e água destilada serão
adicionados a placas de Petri contendo cultura de D. Flagrans. Posteriormente, incubadas por 30
minutos a temperatura ambiente para permitir a difusão ao meio de cultura. Aproximadamente 300
L3 ou Panagrellus spp. serão adicionados ao cultivo e incubadas a temperatura ambiente. A
atividade predatória será quantificada no microscópio óptico após 2, 4, 6 e 8h de interação para se
verificar o número de L3 ou Panagrellus spp. apreendidos nas armadilhas do fungo. O fungo será
cultivado também em lâminas e posteriormente 50 L3 ou Panagrellus spp. adicionados. Após 2, 4, 6
e 8 de interação, 50 μL do substrato fluorogênico calcofluor (Sigma) serão adicionados. As
armadilhas formadas e nematoides capturados serão observados e fotografados nestes intervalos
de tempo usando o microscópio confocal. Até o momento foi observado que as armadilhas estavam
formadas no intervalo de 2 h e já apreendiam os nematoides, porém tornam-se fluorescentes a partir
das 6 h de interação fungo X L3. A intensidade de fluorescencia nas hifas foi inferior ao observado
nas armadilhas. Estes dados, a priori, sugerem que a quitinase é produzida pelo fungo D. Flagrans
durante o processo de penetração na cutícula dos nematoides.