A SUPLEMENTAÇÃO COM L-ARGININA AUMENTA A ATIVIDADE MITOCONDRIAL E A FUNCIONALIDADE DE JUNÇÕES GAP EM OÓCITOS BOVINOS MATURADOS IN VITRO

O processo de maturação dos complexos cumulus-oócito (COCs) é um dos eventos mais impactantes na produção in vitro de embriões, sendo por meio deste, que os oócitos tornam-se células fertilizáveis. A L-arginina (L-arg) é um aminoácido semi-essencial, precursor de importantes metabólitos, como o óxido nítrico (NO), participando da síntese de proteínas, uréia, creatina, agmatina e L-ornitina. Sua disponibilidade in vitro para a síntese de NO é um dos pontos principais no controle oxidativo. O NO vêm sendo estudado no processo de MIV, estando envolvido em vários eventos relacionados à qualidade do oócito, além de participar do balanço NO-O2 mitocondrial, essencial para o equilíbrio oxidativo das células. A maioria dos estudos utiliza doadores de NO para a suplementação deste radical nos cultivos in vitro. No entanto, utilizar L-arg no meio de cultivo em vez de doadores de NO para avaliar seu papel na MIV de oócitos, proporciona melhor controle na quantidade de NO sintetizado pelas células em cultura, assim como na sua utilização em outras vias de sinalização. O presente estudo objetivou avaliar a suplementação em diferentes concentrações de L-arg no meio de MIV de COCs bovinos e seus efeitos na atividade mitocondrial e nas junções GAP. Os ovários foram coletados em matadouros. Após a punção dos folículos, os COCs foram selecionados em estereomicroscópio e divididos em 5 grupos de 30 (GC+: controle positivo; GC-: controle negativo; G1: 0,625 mM de L-arg; G2: 1,25 mM de L-arg; G3: 2,5 mM de L-arg), em 6 repetições. Para a análise da atividade mitocondrial, os oócitos foram marcados com JC-1® após transcorridas 22 h de MIV, exceto o GC- marcado às 0 h. Para a análise de junções GAP, os oócitos foram corados com calceína após 4 h de MIV, sendo GC- maturado na presença de carbenoxonona (CBX®, bloqueador irreversível das junções GAP). Os oócitos foram avaliados por microscopia de epifluorescência e a contagem de pixels foi realizada com auxílio do ImageJ®. A atividade mitocondrial dos grupos G2 (31,78±4,62) e G3 (33,67±8,31) diferiu do GC+ (16,1±4,2), GC-(12,08±1,0) e G1 (15,8±4,22) (P<0,05). Quanto a funcionalidade das junções GAP, G3 (37,93±12,83) apresentou uma maior intensidade de fluorescência que todos os grupos, GC+ (19,04±2,8), G1 (19,23±3,03) e G2 (26,37±6,68) mostraram maior intensidade de fluorescência que GC- (4,25±2,46) (P<0,05). Conclui-se que a suplementação com L-arg no meio de MIV de oócitos bovinos aumenta a atividade mitocondrial e prolonga o tempo de funcionalidade das junções GAP, proporcionando uma melhor qualidade dos COCs, o que poderá refletir, tanto no aumento da percentagem de embriões produzidos in vitro, como na sua qualidade.