Gluconacetobacter diazotrophicus é uma bactéria promotora do crescimento vegetal capaz de colonizar espécies vegetais economicamente relevantes. Contudo, o sucesso da colonização depende da sua capacidade de resistência a estresses bióticos e abióticos comumente encontrados no ambiente. Apesar do genoma de G. diazotrophicus conter genes potencialmente relacionados a resistência a estresses, poucos destes foram caracterizados nesta bactéria. Entre esses genes estão gshB e ggt, os quais estão envolvidos no metabolismo de glutationa, principal molécula de proteção contra estresse oxidativo em bactérias. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o papel dos genes gshB e ggt na resistência de G. diazotrophicus PAL5 aos estresses osmótico (sacarose e PEG), salino (NaCl) e por metais pesados (Co, Cd e Zn). Para tanto, a estirpe selvagem e os mutantes ∆gshB e ∆ggt foram crescidos em meio líquido LGI-M (250 rpm e 30 ºC) até a DO600nm 1,0 (1x108 UFC/mL-1). Em seguida, 10 µL de cada cultura bacteriana foram inoculados em placas de Petri contendo meio LGI-M sólido com a suplementação de diferentes concentrações de CdCl2 (0 mM; 0,01 Mm; 0,03 mM; 0,035 mM), CoCl2(0 mM; 0,7 mM; 3 mM; 4,5 mM), ZnCl2 (0 mM; 0,5 mM; 1,5 Mm; 2,5 mM), NaCl (0 mM; 80 Mm; 97 mM; 105 mM), PEG 4000 (0 mM; 100 mM, 200 mM; 300 mM) e sacarose (0 mM; 300 mM; 600 mM). As placas foram incubadas em estufa (30 ºC, 72 horas). Para avaliar a sensibilidade das estirpes, foi feito o registro fotográfico das placas e as imagens foram processadas no Software ImageJ para a quantificação do crescimento das colônias. Com o GraphPad Prism foi feito o test t (p<0,05). Os resultados mostraram que o mutante ∆gshB apresentou sensibilidade a cádmio (0,035 mM) de 51% e ao zinco (1,5 mM e 2,5 mM) de 52% e 53%, respectivamente. O mutante ∆ggt mostrou alta sensibilidade nas concentrações mais elevadas de cobalto, afetando 94% (3 mM) e 96% (4,5 mM) o crescimento bacteriano. Em relação a cádmio e zinco, o mutante ∆ggt mostrou alta sensibilidade em todas as concentrações utilizadas. Nos demais estresses, os mutantes não apresentaram diferença significativa em relação à estirpe selvagem. A maior resistência de ∆gshB pode ser derivada da proteína intermediária, gamma-glutamil-cisteína, presente nesse mutante, da via de síntese da glutationa que é capaz de proteger a célula contra o estresse oxidativo. Já a alta sensibilidade de ∆ggt pode ser gerada pela ausência de fonte adicional de glutationa ao interior celular promovida por este gene. Diante disso, os resultados sugerem que a glutationa desempenha um papel essencial na defesa de G. diazotrophicus ao estresse causado por metais pesados.