IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS ANTIMICROBIANOS DE FOLHAS E RAÍZES DE Capsicum annuum L. E ATIVIDADE SOBRE MICRORGANISMOS FITOPATOGÊNICOS

As plantas desenvolveram vários mecanismos de defesa visando superar o ataque de patógenos, incluindo a produção de diversas famílias de peptídeos antimicrobianos (AMPs). Estudos mostraram que Capsicum annuum L., acesso UENF 1381, apresenta resistência a algumas doenças, inclusive causadas por fungos fitopatogênicos. O objetivo deste trabalho é estudar fatores de resistência do acesso UENF 1381, por meio da identificação e da determinação estrutural de AMPs presentes em folhas e raízes. Em nossos experimentos, sementes autofecundadas de C. annuum foram cultivadas por 45 dias em meio ½-MS. Em seguida, as folhas foram inoculadas com a bactéria X. euvesicatoria (108 UF /mL) ou tratadas com água (controle). Amostras de folhas e raízes foram coletadas no tempo de 12, 24 e 48h após a inoculação. Em seguida, foi realizada extração proteica e eletroforese para caracterização dos AMPs. A eletroforese revelou que os extratos protéicos de folhas e raízes apresentaram bandas majoritárias com baixa massa molecular entre 6 e 8 kDa. Os extratos de folhas (FC48) e raízes (RC48) tratados com água, coletados após 48h, foram selecionados para purificação e posterior caracterização, devido à expressão diferenciada de bandas de baixa massa molecular. Para purificação, os extratos FC48 e RC48 foram submetidos a cromatografia de fase reversa em sistema HPLC usando uma coluna de fase reversa C18 com coluna guarda C8. O perfil cromatográfico do extrato FC48 apresentou 23 picos denominados F1 a F23 e o perfil do extrato RC48 apresentou 27 picos denominados R1 a R27. Os extratos foram submetidos novamente a eletroforese para caracterização, alguns revelando bandas únicas de 6 kDa. Em experimentos recentes, 50 µg/mL das frações F1, F6, F7, F8, F9, F10, F11, F12, F13,F14 e F15, obtidas de folhas, foram testadas em um experimento de inibição de crescimento com o fungo Colletotrichum gloeosporioides. Apenas a fração F1 foi capaz de inibir, em 48h, o crescimento do fungo, sendo capaz de inibir 95,38% do mesmo. O mecanismo ação da fração F1 quanto a permeabilização de membranas do fungo foi avaliada com sonda SYTOX green. Nossos resultados mostraram que a fração F1 foi capaz de permeabilizar a membrana do fungo C. gloeosporioides. Com esses resultados esperamos contribuir para a aplicação biotecnológica de AMPs e para o desenvolvimento de novas cultivares de Capsicum resistentes a microrganismos.