O uso do CO2 supercrítico (CO2-SC) como agente esterilizante é uma das técnicas mais promissoras para a esterilização de líquidos e materiais sólidos e tem recebido especial atenção de pesquisadores nas últimas décadas. Esta tecnologia apresenta potencial para substituir os processos químicos e térmicos utilizados atualmente, os quais são eficientes, porém podem promover danos ao material esterilizado. O presente trabalho investigou o efeito do CO2-SC em diferentes pressões (100 a 300 bar), temperaturas (30 a 60°C) e tempos de tratamento (30 a 120 min) na inativação de esporos de Bacillus subtilis inoculados em implantes-teste (placas de aço-inox, 1 x 1 cm). Ciclos de pressurização/despressurização e a adição de um agente antimicrobiano (nisina) também foram testados. Observou-se uma redução na concentração de esporos superior a 6 ciclos logarítmicos no tratamento com CO2-SC a 300 bar e 60°C em combinação com nisina e 4 ciclos de pressão (30 min cada, deltaP = 300bar).