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Erythrolamprus miliaris distribui-se amplamente na América do Sul e é abundante em habitats como a Mata Atlântica brasileira. Ovípara, possui hábito semi-aquático, alimentando-se principalmente de peixes e anuros. A coleta e avaliação seminal são essenciais para programas de reprodução em cativeiro, possibilitando a seleção dos melhores reprodutores e o desenvolvimento de protocolos de preservação seminal. Por possuir atividade espermatogênica contínua, E. miliaris é um excelente modelo para o desenvolvimento de biotécnicas reprodutivas em serpentes. Este trabalho objetiva testar uma técnica de coleta e avaliar os parâmetros seminais desta espécie. Foram utilizados seis machos mantidos no biotério do Laboratório de Ecologia e Evolução do Instituto Butantan (CEUAIB 7317040915), que apresentaram CRC de 560 ± 58,3 mm e 86,5 ± 32,72 g de massa. Para coleta do sêmen foram realizadas massagens ventrais no terço final do animal e o material foi colhido com capilar microhematócrito. Parte do sêmen obtido foi diluída em meio HAM-F10 para avaliação da motilidade e vigor e outra parte em solução de formol salino para avaliar concentração e morfologia espermática. O sêmen apresentou coloração branca ou levemente amarelada, consistência espessa e volume médio de 5,08±2,34 μL. A motilidade foi de 68±10,95 % com vigor espermático de 4,2±0,84. A concentração seminal foi de 1,13±0,26 x109sptz/mL. Nossos dados demonstram que esta técnica de coleta pode ser usada de maneira segura e eficaz em E. miliaris, permitindo o desenvolvimento e aprimoramento de outras biotécnicas reprodutivas como IA e preservação seminal.
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