Validação de um kit de genotipagem de 27 Y-STR para estudos forenses e populacionais na população brasileira

O Investigator ARGUS Y-28 QS é um novo kit de genotipagem com 27 Y-STRs. Ele inclui 2
sensores de qualidade que são indicadores da presença de inibidores ou problemas no
processo de amplificação. A combinação destes marcadores aumenta a habilidade de
diferenciar homens relacionados em análises forenses. Este trabalho teve como objetivo
validar este novo kit quanto ao seu potencial em genotipar amostras forenses, assim como
caracterizar seu poder de discriminação na população brasileira. Para o estudo do kit ARGUS Y-
28, amostras de sangue e saliva foram coletadas, com consentimento informado, de homens
não relacionados residentes de diferentes estados brasileiros. Utilizando o protocolo original
do kit, os seguintes parâmetros foram testados: (i) sensibilidade, i.e., capacidade do kit de
gerar perfis completos com pequenas quantidades de DNA; e (ii) performance em misturas,
i.e., capacidade de detectar perfis de DNA masculino em altas concentrações de DNA feminino.
Com o objetivo de utilizar menos reagentes na amplificação de amostras populacionais,
mudanças no protocolo original foram realizadas, como utilizar diferentes volumes de PCR (de
25μl para 12,5μl e 5μl) combinados com diferentes concentrações de DNA (1ng e 0,5ng). As
amostras foram amplificadas e analisadas para em seguida designar seus haplogrupos, e o
poder de discriminação foi calculado utilizando o programa Arlequin. Os resultados obtidos
demonstram que o ARGUS Y-28, quando amplificado em seu protocolo original, permite obter
perfis completos com concentrações a partir de 0,175ng. Em misturas de homem e mulher,
foram alcançados perfis completos de Y-STRs com 1ng de DNA masculino, mesmo com altas
quantidades de DNA feminino, assim como com baixas quantidades de DNA masculino
(0,17ng) na presença de 250ng de DNA feminino. Perfis completos foram obtidos com volumes
de 12,5μl e 5μl na PCR, com 28 ciclos. Ao utilizar 0,5ng de DNA, a faixa de detecção de alelos
ficou entre 3000 e 10000 RFU, enquanto com 1ng de DNA os alelos foram detectados acima de
18000 RFU, gerando ruídos de fundo comprometedores. Em conclusão, o kit demonstra ótima
compatibilidade para análises forenses, fornecendo resultados confiáveis em todos os
marcadores, mesmo em baixas concentrações de DNA. Ainda mais, foram alcançados
resultados robustos ao amplificar pequenas quantidades de DNA masculino, mesmo na
presença de altas quantidades de DNA feminino, o que é fundamental em casos que envolvem
violência sexual. O alto poder de discriminação obtido indica que o kit também é ideal para
análises forenses do cromossomo Y no Brasil.