O Brasil é um dos maiores produtores de suco de laranja, ele exporta 98% do que é produzido e sua participação no mercado internacional é de 85%. Alicyclobacillus acidoterrestris são bactérias Gram-positivas, aeróbicas, não patogênicas, e formadoras de esporos, os quais não conseguem ser eliminados no processo de pasteurização. Devido a esses fatores, torna-se necessário estudar métodos que ajudem a prevenir o crescimento e proliferação dessa bactéria. O uso de antimicrobianos naturais vem se tornando uma alternativa. Óleos essenciais (OE) são reconhecidos por possuir atividades antimicrobianas, antioxidantes, entre outras. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a ação antimicrobiana do OE de eucalipto (Eucalyptus globulus) nas células vegetativas de A. acidoterrestris (CBMAI 0244T). Para avaliar os efeitos do OE, utilizou-se a técnica de microdiluição em placas de 96 poços. Foi utilizado o meio de cultura BAT (Bacillus acidoterrestris), com pH 4,0. Para os ensaios de Concentração Inibitória Mínima (CIM) foram pesados 16 mg do OE (Sigma-Aldrich^®) e calculado sua concentração, no qual foram adicionados 5% de Tween 80 (1% v/v). As concentrações do OE de eucalipto variaram de 8000 a 15,63 µg/mL. Logo após foram adicionados 5 µL de inóculo padronizado a 10⁴ UFC/mL em cada poço e a placa foi incubada a 45 ºC por 24h. A CIM foi determinada como sendo a menor concentração capaz de inibir o crescimento do microrganismo. Para a determinação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) realizou-se subcultivos de 20 µL em placas de ágar BAT de todos os poços que não obtiveram crescimento bacteriano visível e após incubados a 45 ºC por 24h. A concentração plaqueada onde não houve crescimento de colônias foi considerada a CBM. Os resultados obtidos para a CIM e CBM foram de 250 e 500 µg/mL, respectivamente. Esses resultados indicam que o OE de Eucalyptus globulus pode ser utilizado como um agente antibacteriano no controle do A. acidoterrestris. Estudos futuros são necessários para avaliar seus efeitos e sua aplicação em alimentos.