A água é fundamental para todas as formas de vida em geral, principalmente para o funcionamento do organismo humano, onde atua na distribuição dos devidos nutrientes e até mesmo na regulação da temperatura corporal. As águas subterrâneas são uma parcela de água precipitada que ocorre abaixo da superfície terrestre, sendo importantes reservas de água doce, o que torna seu uso mais vantajoso para a população. Segundo a Portaria nº 2914 de 2011, estipulada pelo Ministério da Saúde e a Resolução nº 396 de 2008, do Conselho Nacional do Meio Ambiente, estipula que a presença de Escherichia coli em água torna a mesma imprópria para o consumo humano, indicando que tal contaminação possa estar ligada a processos humanos e/ou naturais. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade microbiológica da água subterrânea de poços utilizados para o consumo humano, na cidade de Dourados, Mato Grosso do Sul, Brasil. O estudo ocorreu entre os meses de setembro e dezembro de 2015 e foram analisados 16 poços, por conveniência. A coleta foi realizada em frascos de vidros previamente esterilizados. Para a detecção da presença ou ausência de coliformes totais e E. coli foi utilizado um substrato cromogênico e fluorogênico Colilert^®, no qual foram analisados 100 mL de cada amostra em frasco de análise e incubados à 37 °C por 24 horas. A leitura foi realizada sob luz ultravioleta a 365 nm e segundo critério do Colilert^® a presença de coliformes totais é determinada pela cor amarela e para E. coli por fluorescência. Dos 16 poços analisados, 13 amostras apresentaram crescimento de coliformes totais, 10 amostras apresentaram contaminação por E. coli e apenas uma amostra não apresentou contaminação. A presença de coliformes totais e E. coli foi detectada na maioria das amostras e de acordo com os padrões estipulados pelos órgãos legislativos vigentes, a água está imprópria para o consumo humano. Assim, medidas de conscientização e tratamento devem ser tomadas para eliminar microrganismos que podem ocasionar doenças ao ser humano.