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ISOLAMENTO E ENSAIO ENZIMÁTICO PARA LACASE DE MICRORGANISMOS ASSOCIADOS À PLANTA MEDICINAL BACCARIS TRIMERA (CARQUEJA).

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Os processos industriais utilizando enzimas apontam para um mercado em expansão, com projeção anual mundial de 7,0 bilhões de dólares em 2018. Para o aproveitamento deste potencial, é necessário primeiramente, isolar microrganismos produtores da enzima de interesse através de métodos qualitativos. Lacase são enzimas pertencentes ao grupo das multicobre oxidases e se destacam por conta da grande diversidade de substratos que podem oxidar, esta característica tem atraído atenção para atividades industriais e ambientais. Desta forma o presente trabalho teve por objetivo verificar esta capacidade enzimática em microrganismos isoladas da planta medicinal B. trimera. A planta foi coletada em uma área de ocorrência natural na cidade de Ponta Grossa-PR e processadas na UEL. Primeiramente 5 gramas de folhas e 5 gramas de raízes em 100mL de água peptonada foram submetidas a um processo de sonicação para liberação dos microrganismos epifíticos. Após, 1mL foi transferido para erlenmeyer contendo 9mL de meio líquido (extrato de levedura 0,1%, (NH4)2 SO4 0,1%, NaH2PO4 0,2%, MgSO4 0,01%, KCl 0,04%, 40 mg/l CuSO4, guaiacol 0,1%). Em um segundo momento, com o objetivo de isolar microrganismos endofíticos procedeu-se a desinfecção superficial das folhas e das raízes utilizando cloramina T 1%. Após, as folhas e as raízes foram maceradas e então 1mL do macerado foi transferido para erlenmeyer contendo 9mL do mesmo meio líquido anterior. Os frascos foram incubados a 28°C por 3 semanas e a cada semana uma alíquota foi retirada para diluição e plaqueamento em meio sólido (ágar 15%, extrato de levedura 0,1%, (NH4)2 SO4 0,1%, NaH2PO4 0,2%, MgSO4 0,01%, KCl 0,04%, 40 mg/l CuSO4, guaiacol 0,1%). As placas foram incubadas à 28°C por 7 dias e as colônias morfologicamente distintas repicadas para o mesmo meio sólido anterior. Foram selecionados 27 isolados que apresentaram cor castanho avermelhado, indicativo da oxidação do guaiacol pela lacase. Esses organismos, portanto, são positivos e possíveis produtores a nível industrial e ambiental. Antes porém, ensaios quantitativos devem ser realizados para comprovação. Este trabalho nos permite concluir que a planta medicinal B. trimera constituí uma fonte promissora de microrganismos produtores de lacase.