Lipases (EC. 3.1.1.3), também conhecidas como triacilglicerol lipases, são enzimas cuja ação ocorre sob ligações éster de vários compostos com acilgliceróis como seus substratos naturais. As lipases apresentam grande importância industrial e biotecnológica, sendo produzidas por animais, plantas e microrganismos. Os microrganismos destacam-se quanto à produção industrial devido à sua estabilidade, seletividade ou ampla especificidade pelo substrato. Diversos gêneros fúngicos apresentam espécies aptas à produção de lipases, como Candida, Aspergillus, Humicola, Mucor e Rhizopus. Dentre as espécies de fungos filamentosos, Aspergillus niger está entre as espécies cuja produção de lipases são muito importantes comercialmente. Diante disso, o presente estudo selecionou 18 linhagens previamente identificadas como A.niger, quanto à produção de lipases em meio de cultura contendo Tween 20 como substrato. As linhagens foram previamente isoladas de frutas secas e castanha do Brasil e caracterizadas como não produtoras de ocratoxina A e fumonisina. As linhagens foram cultivadas por 4 dias a 28°C, seguido por incubação a 4°C por 12 horas, antes da avaliação. A seleção da produção de lipases em meio de cultura foi realizada em triplicata experimental. Foram determinados o diâmetro médio da colônia, o diâmetro médio do halo de degradação e o Índice Enzimático (IE). Linhagens com IE maior que dois foram consideradas candidatas satisfatórias à avaliação posterior. As dezoito linhagens apresentaram potencial enzimático para degradação de lipídios. No entanto, apenas seis linhagens apresentaram IE maior que dois, havendo destaque para três linhagens, que foram as maiores produtoras de lipases. Estas três linhagens, foram selecionadas como candidatas a avaliação posterior, quanto à melhor produção de lipases com finalidades industrial e biotecnológica. Conclui-se portanto, que A.niger são bons produtores de lipases.