A antibioticoterapia profilática intraparto (API) para as gestantes colonizadas por Streptococcus agalactiae (estreptococo do grupo B – EGB) tem sido uma estratégia eficaz aplicada ao controle de infecções em recém-nascidos. Entretanto, este procedimento tem como consequência o aumento significativo do uso de penicilina (primeira escolha) ou eritromicina e clindamicina (segunda escolha), o que pode induzir a seleção de cepas resistentes entre os isolados de EGB. Uma estratégia para combater a resistência bacteriana é a combinação entre substâncias antimicrobianas, sejam elas antibióticos comerciais, produtos naturais ou nanopartículas metálicas. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar a atividade antibacteriana in vitro da combinação entre eugenol (Sigma) e nanopartículas de prata produzidas por Fusarium oxysporum (AgNPbio) contra EGB. Foram testadas seis amostras clínicas e S. agalactiae ATCC 13813. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi realizada pelo método de microdiluição em caldo e para a Concentração Bactericida Mínima (CBM), foram retirados 10 µL dos poços onde não havia crescimento bacteriano e inoculados em ágar sangue (AS). A faixa de concentração avaliada para o eugenol foi de 0,015% a 1% e para AgNPbio foi de 0,49 a 500 µM. O efeito da combinação dos compostos foi avaliado a partir da concentração inibitória fracional (FIC), estabelecida pelo método do checkerboard, sendo que a interação foi considerada sinérgica quando FIC ≤ 0,5. A CIM e a CBM variaram de 0,125% até 0,25% para o eugenol e de 62,5 µM até 500 µM para AgNPbio. A combinação do eugenol com AgNPbio mostrou efeito sinérgico para todas as amostras de EGB estudadas, provocando redução de 4 a 8 vezes nos valores de CIM do eugenol e de 4 a 16 vezes para AgNPbio. Os resultados obtidos neste estudo mostram a efetividade da combinação de eugenol com AgNPbio como alternativa promissora para o desenvolvimento de agentes utilizados no tratamento tópico da colonização vaginal materna por EGB.