A bactéria Streptococcus agalactiae tem importância não só zoonótica, como também em bovinos, acarretando mastite em vacas leiteiras. Em estudos mais recentes, vem acometendo diversas espécies de peixes incluindo tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), ocasionando meningoencefalite, sendo responsável por grandes prejuízos econômicos pelas altas taxas de mortalidade em pisciculturas. Esta possui grande variabilidade genética, contribuindo para o aparecimento de cepas com perfil de virulência diferentes. Visto sua importância epidemiológica, o presente trabalho teve como objetivo determinar a DL50 da cepa S13, a qual foi isolada de um surto na cidade de Alvorada do Sul, no Paraná, no ano de 2015, da conjuntiva ocular, pela equipe do Laboratório de Bacteriologia da UEL. Foi realizado o cultivo da cepa em Ágar Sangue a 28ºC por 48 horas e posteriormente enriquecimento em caldo BHI por 18 horas sob as mesmas condições de cultivo. Após seu crescimento, realizaram-se diluições seriadas na escala 10, pela adição de 0,5 ml da bactéria suspensa em 4,5 mL de solução salina. A seguir, foram distribuídas cinco gotas de 20 µl em placas de Ágar Sangue para cultivo a 28ºC e posterior contagem bacteriana. Foram inoculados 0,2 mL das bactérias na cavidade peritoneal dos peixes, utilizando-se seringas de insulina descartáveis. Após o procedimento, a mortalidade foi acompanhada durante quinze dias, com o aparecimento dos sinais clínicos que consistiram em natação errática, exoftalmia uni ou bilateral e hemorragia ocular. Baseados nos dados obtidos com a observação dos respectivos aquários e após as devidas análises estatísticas, verificou-se que mortalidade e dosagem (UFC/ml) são grandezas diretamente proporcionais, sendo dada a porcentagem de mortalidade pela equação y = 8E-09x + 0,5086 onde x é a quantidade de colônias por mililitros. Logo, a dose DL50 de S. agalactiae para tilápias do Nilo corresponde a 6,19E x 05 (6,19 x 10⁵) UFC/peixe quando inoculada intraperitonealmente. Constatou-se também que entre o quarto e sétimo dia pós-infecção estão localizadas as crescentes nos índices de mortalidade de forma geral. Estudos genéticos adicionais serão realizados para melhorar a caracterização da cepa isolada bem como melhor entendimento da sua patogenia.