A bactéria Streptococcus iniae é cocos gram-positiva, capaz de colonizar a superfície dos peixes ou provocar doença invasiva associada à mortalidade de 30 a 50 % em viveiros afetados. Tilápias infectadas tornam-se letárgicas, com natação errática, apresentam rigidez dorsal, e morrem dentro de alguns dias. Estudos patológicos mostram tropismo pelo sistema nervoso central, ocasionando meningoencefalite. Ademais, este é uma importante causa de morbidade e mortalidade em pisciculturas. Suas ilhas de patogenicidade têm um papel importante na virulência e na aquisição de diversidade genética, apresentando elementos genéticos carreadores de genes de resistência a antibóticos. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração bactericida mínima do antibiótico florfenicol para um isolado de S. iniae, S20, isolado do cérebro oriundo de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) em um surto de septicemia hemorrágica, em uma tilapicultura do Paraná, no ano de 2015, pela equipe do Laboratório de Bacteriologia da UEL. A cepa de Escherichia coli ATCC 25922 foi usada como padrão da técnica. A metodologia empregada foi a macrodiluição em caldo. A linhagem de S. iniae e E. coli foram enriquecidas em caldo BHI e incubadas a 28ºC e a 37ºC por 24 horas, respectivamente. Após crescimento, foram suspensas em solução salina 0,85%, de acordo com a escala 0,5 de McFarland e posteriormente, adicionadas em tubos com meio de cultura com as diferentes concentrações de florfenicol. Para o isolado de S. iniae (S20) o valor do MIC correspondeu a 9,37 µg/mL, já para os isolados de E. coli (ATCC 25922), o valor do MIC foi de 3,75 µg/mL. O valor da concentração bactericida mínima encontrada para a bactéria S. iniae (S20) foi de 15 µg/mL, entretanto, apesar de encontrarmos o MIC para a bactéria E. coli (ATCC 25922), não foi possível detectar sua concentração bactericida mínima. O presente trabalho comprova a atividade antimicrobiana do florfenicol em tilápias. O uso deste antibiótico pode inferir uma alternativa terapêutica eficiente, contra infecções bacterianas causadas por Streptococcus iniae, entretanto, sugere a continuidade nos estudos para se conhecer o perfil de outras amostras da mesma espécie e de outros patógenos de importância na tilapicultura e testar a utilização de outros antimicrobianos.