DETECÇÃO DE qnrA e qnrS EM Escherichia coli RESISTENTE ÀS QUINOLONAS ISOLADA DE PERUS
As quinolonas são agentes antimicrobianos de amplo espectro de ação usados no combate a infecções bacterianas ou como alternativa em situações em que o microrganismo possui resistência aos betalactâmicos. Como mecanismo de ação, atuam inibindo as enzimas Topoisomerase II e DNA Girase, essenciais à replicação bacteriana. A resistência bacteriana ocorre principalmente pela alteração da enzima DNA girase, que não sofre mais a ação do antimicrobiano. Esta alteração pode ocorrer por mutação cromossômica nos genes responsáveis pela enzima alvo ou por alteração da permeabilidade à droga pela membrana celular (porinas), característica que pode ser adquirida por plasmídios. Os mecanismos de resistência adquiridos através de plasmídios são mediados pelos genes qnrA, qnrB, qnrS e seus variantes. O presente trabalho avaliou a presença dos genes qnrA e qnrS em amostras de Escherichia coli, cujo teste de disco difusão realizado previamente demonstrou sensibilidade reduzida a quinolonas (ácido nalidíxico) e fluoroquinolonas (ciprofloxacino, norfloxacino e enrofloxacino), isoladas de perus enviadas pelo Laboratório de Saúde das Aves, IPVDF Fepagro Saúde Animal, RS, por PCR. A extração do DNA genômico foi realizada pelo método de fervura e para a reação de amplificação para a detecção do gene qnrA foi utilizado solução contendo tampão de reação (Tris-HCl 10mM pH 8,3, KCl 50mM), MgCl2 1,5mM, 200mM de cada deoxinucleotídeo trifosfato (dNTP), 20pmol de cada um dos 2 oligonucleotídeos iniciadores (QnrA-F e QnrA-R) e 2,5 U de Taq polimerase (Invirogen). A detecção do gene qnrS seguiu as mesmas condições diferindo apenas na concentração de MgCl2 2,0mM. Os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 2% e corados com GelRedTM. De 99 amostras de E. coli isoladas de perus que apresentaram sensibilidade reduzida à ácido nalidíxico, ciprofloxacino, norfloxacino e enrofloxacino, 6 apresentaram o gene qnrA (6,06%) e 4 apresentaram o gene qnrS (4,04%). A ocorrência da resistência adquirida à quinolonas é baixa porém relevante, visto que plasmídios de resistência são facilmente disseminados entre os microrganismos. Com a padronização, o protocolo otimizado poderá então ser aplicado para determinação da presença dos genes plasmidiais qnrA e qnrS em amostras de E.coli aviárias.