Efluentes hospitalares constituem ambientes de alta pressão seletiva sob microrganismos potencialmente multirresistentes e patogênicos. Tais ambientes contribuem para a rápida aquisição de genes de resistência em microrganismos da família Enterobacteriaceae, que compreendem vários microrganismos envolvidos em infecções hospitalares e são responsáveis por causarem infecções graves devido a presença de determinantes de resistência aos ß-lactâmicos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a presença de genes codificadores de ß-lactamases em isolados da família Enterobacteriaceae provenientes de amostras coletadas do efluente do Hospital Universitário de Londrina (HU), da Estação Elevatória de Esgoto do Limoeiro, da Estação de Tratamento de Esgoto Sul de Londrina anterior e posterior tratamento, e do Ribeirão Cambezinho que recebe o esgoto tratado desta estação (num ponto há 200 metros do local de liberação do efluente tratado). A identificação bacteriana foi realizada por triagem bioquímica convencional, e a detecção de genes codificadores de ß-lactamases de espectro ampliado (ESBL) bla_TEM, bla_SHV, bla_CTX-M e bla_GES, e de carbapenemases bla_KPC, bla_NDM e bla_OXA-48 foram realizados por PCR single e PCR multiplex. Um total de 72 isolados da família Enterobacteriaceae foram recuperados dos locais de coleta, onde: 66 (91,6%) apresentaram o gene bla_TEM, 30 (41,6%) o gene bla_SHV e 31 (43,0%) diferentes genes codificadores do grupo bla_CTX-M. Os genes bla_TEM, bla_SHV e bla_CTX-M foram identificados em todos os locais de coleta diferentemente dos genes bla_GES, bla_NDM e bla_OXA-48 que não foram detectados em nenhum dos isolados. Adicionalmente, 9 isolados (12,5%) apresentaram o gene bla_KPC em isolados provenientes do HU (6), afluente (1) e efluente (2). Estudos futuros de tipagem molecular e sequenciamento serão conduzidos para avaliar a similaridade de clones presentes no ambiente hospitalar com os isolados dos efluentes. A diversidade de genes codificadores de ß-lactamases detectados nos microrganismos isolados de efluentes refletem uma ameaça silenciosa à saúde pública, devido ao fato de que as águas residuárias podem constituir reservatórios de genes de resistência. Assim como, a presença de gene bla_KPC no efluente tratado evidencia a ineficácia do tratamento de esgoto em retirar microrganismos carreadores de importantes genes de resistência de relevância mundial.