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CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DAS XILANASES PRODUZIDAS POR Trichoderma viride

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Devido a suas inúmeras aplicações biotecnológicas, pesquisas com xilanases que apresentem propriedades mais adequadas às aplicações industriais vêm sendo realizadas. O objetivo desse estudo foi determinar as propriedades físico-químicas das xilanases produzidas por uma linhagem de Trichoderma viride. O referido fungo foi repicado em meio sólido de Vogel e incubado a 28 °C durante sete dias para a produção de esporos. Posteriormente, 1,0 mL de uma solução contendo 107 esporos mL-1 foi inoculada em 25 mL de meio líquido de Vogel e então cultivado 28 °C, pH 6,0, por 6,5 dias, empregando-se 3,5% de casca de abacaxi como substrato. Em seguida, a cultura foi filtrada a vácuo e o filtrado obtido utilizado como fonte de xilanases. A atividade xilanásica foi determinada utilizando-se uma solução 1 % (m/v) de xilano de beechwood em tampão McIlvaine pH 6,5, a 45 °C. Após períodos determinados, a determinação de açúcares redutores liberados foi realizada pelo método de Miller (1959), utilizando-se a xilose como padrão. O pH e a temperatura ótima de atividade foram estabelecidos por meio do emprego do Delineamento Central Composto Rotacional (DCCR). Os experimentos foram realizados por 23 fatorial: temperatura [S] e pH de incubação [pH], com cinco níveis, gerando 11 combinações de tratamentos com três amostras no ponto central e quatro pontos axiais. A estabilidade enzimática frente ao pH foi conduzida pela diluição do filtrado enzimático em tampão McIlvane (1:2) no intervalo de pH 3,0 a 7,0, incubado à 4 °C, por 24 horas. A estabilidade térmica foi avaliada pela incubação do filtrado em diferentes períodos de tempo, a 45 °C, na ausência do substrato. Os resultados obtidos evidenciaram que os termos quadráticos pH e temperatura exerceram influência significativa sobre a atividade a atividade das xilanases de T. viride. A melhor temperatura estabelecida como ótima para essas enzimas foi 45 °C e o melhor pH de atividade 5,5. Em relação à estabilidade das xilanases frente aos diferentes valores de pH avaliados, esta enzima mostrou-se estável em um amplo intervalo do pH 3,5 a 7,0, constatando-se mais 70% de sua atividade residual. Ainda, as enzimas foram bastante estáveis a 45 °C, apresentando uma meia vida (T1/2) de aproximadamente 150 min. O presente estudo fornece informações importantes, a fim de se inferir possíveis aplicações industriais para essas enzimas.