Infecções bacterianas do trato urinário inferior são afecções muito comuns na clínica de pequenos animais. Os principais agentes causadores dessas infecções são as bactérias Gram negativas, como Escherichia coli e Proteus spp., porém as Gram positivas (Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.) também são encontradas com grande frequência. Os grupos de antimicrobianos mais utilizados para o tratamento dessas infecções são as penicilinas, cefalosporinas, quinolonas e aminoglicosídeos. O presente trabalho teve como objetivo verificar a prevalência dos principais gêneros bacterianos em amostras de urina processadas no Laboratório de Bacteriologia do HV-UEL, bem como analisar o perfil de resistência aos antimicrobianos utilizados na rotina clínica. No período de março de 2015 a março de 2016 foram processadas 220 amostras de urina de cães e gatos atendidos no HV-UEL. Todas as amostras foram semeadas em caldo BHI, incubadas a 37°C por 24 a 48 horas, as amostras que apresentaram turvação foram repicadas em placas de ágar sangue e ágar MacConkey para obtenção de colônias isoladas. Foram realizadas coloração de Gram, teste da catalase e esculina para identificação de bactérias Gram positivas; e teste da oxidase e utilização de kits Bactray para identificação bioquímica de bactérias Gram negativas. Das 220 amostras, 109 (49,5%) foram consideradas negativas, não apresentando crescimento em nenhum dos meios, e 111 amostras (50,5%) foram positivas. Escherichia coli foi a bactéria mais prevalente entre os isolados, estando presente em 35,7% das amostras, seguida por Streptococcus spp. (21.4%), Staphylococcus spp. (19%), Proteus spp. (10.3%), Klebsiella spp. (4%), e outras bactérias (Hafnia alvei, Pseudomonas spp., Acinetobacter spp., Bacillus spp e Enterobacter spp.) com 9,6% das amostras. Foi realizado antibiograma de todas as bactérias isoladas. Para as cepas Gram positivas, os maiores índices de resistência foram relacionados às quinolonas e sulfonamidas. Já as Gram negativas apresentaram altos índices de resistência para as penicilinas, sulfonamidas, cefalosporinas e também às quinolonas, apresentando uma maior sensibilidade aos aminoglicosídeos. Os resultados deste estudo reforçam a importância do isolamento bacteriano seguido do antibiograma na rotina clínica, tanto para a escolha do tratamento, e principalmente para evitar a seleção de bactérias multirresistentes.