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AVALIAÇÃO DA MICROBIOTA INTESTINAL DE RATTUS WISTAR SUBMETIDOS AO FUMO PASSIVO SUPLEMENTADOS COM PREBIÓTICOS, PROBIÓTICOS E SIMBIÓTICOS.

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A integridade da microbiota intestinal é essencial para homeostasia do organismo e para sua manutenção a suplementação de prebióticos, probióticos e simbióticos tem papel fundamental. O objetivo deste trabalho é avaliar alterações de massa populacional de bactérias dos gêneros Lactobacillus, Bifidobacterium e Escherichia coli na microbiota intestinal de Ratos submetidos ao fumo passivo e a suplementação de prebióticos, probióticos e simbióticos incorporados a dieta basal. Testou-se em 100 ratos Wistar machos jovem, com 21 a 25 dias e 45 -50g de peso corporal, divididos em oito grupos de acordo com a suplementação recebida em associação a dieta basal e a exposição a fumaça, contendo 10 ratos em cada grupo. Os animais foram mantidos em caixas fechadas e expostos a fumaça duas vezes por dia 30 minutos de manhã e 30 minutos a tarde por um período de 95 dias, sendo 5 dias período de adaptação ao manejo dos animais. Os dados obtidos serão comparados entre si e a análise estatística será realizada através do método linear. Resultados parciais: As amostras de DNA fecal foram extraídas utilizando-se DNA Mini-Stool Kit (QIAGEN) e quantificadas utilizando-se espectofotômetro. Do total de 80 amostras extraídas, 57 apresentaram leitura de DNA acima de 30 ug/ml. Das 23 amostras que apresentaram leitura negativa para DNA genômico em espectofotômetro, todas foram submetidas à ensaios de amplificação por PCR utilizando primers para amplificar o gene ribossomal, subunidade 16S para procariotos. Os resultados obtidos revelaram a presença do fragmento de 350 pb correspondente a região 16S. Sendo assim, os resultados obtidos até o momento sugerem que embora o DNA genômico presente nas amostras não tenham gerado leituras significativas em espectofotômetro, apresentam-se em quantidades suficientes para amplificar o produto do PCR nas 23 amostras testadas, indicando que a quantidade de DNA presente na amostra é suficiente para ser utilizada nos demais experimentos em ensaios futuros de PCR para a determinação da alteração da microbiota intestinal, ou seja, as amostras de DNA fecal serão analisadas para quantificação do gene 16rDNA através de PCR em tempo real para os gêneros Lactobacillus, Bifidobacterium e E. coli, através de primers específicos para cada gênero.