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AVALIAÇÃO DA MACROMORFOLOGIA E DO PERFIL DE INVASÃO AO ÁGAR DE VARIANTES FENOTÍPICOS DE C. tropicalis CULTIVADOS EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE GLICOSE

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O aumento significativo de doenças causadas por fungos nas últimas décadas vem chamando a atenção de muitos pesquisadores da área da saúde. Trabalhos realizados por nosso grupo revelaram que no Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina-PR a incidência de C. tropicalis corresponde a 33,2% das cepas isoladas. O switching fenotípico pertence ao arsenal de fatores de virulência presentes em C. tropicalis e está relacionado à emergência espontâneas de colônias com morfologias alteradas. A capacidade de realização de switching fenotípico permite ao micro-organismo adaptação a diferentes microambientes, propiciando vantagens seletivas dentro do hospedeiro. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da suplementação diferenciada de glicose em meio de cultivo YPD na morfologia de variantes fenotípicos (parental, variantes e revertentes) de C. tropicalis do isolado 49.07. Para isso, células obtidas dos morfotipos do isolado 49.07 foram inoculadas em 3 mL de YPD (1% extrato de levedura, 2% peptona, 2% glicose), sendo em seguida incubadas por 24h à 28 ºC e 180rpm. Em seguida suspensões padronizadas contendo 6x103 células/mL foram plaqueadas em meio YPD solidificado suplementado com diferentes concentrações de glicose (0,5%, 1,0%, 1,5%, 2,0%, 2,5%, 3,0% e 3,5%). Posteriormente as colônias obtidas foram registradas em estereomicroscópio trinocular (Motic SMZ-168). Em seguida utilizando a técnica de footprint as colônias foram removidas do ágar por lavagem com água destilada estéril e coradas com solução de 0,1% de Comassie blue R 250 em 40% de metanol e 10% de ácido acético por 1 hora. Após o tempo decorrido o excesso de corante foi removido com uma solução contendo 40% de metanol e 10% de ácido acético. Por fim as células coradas foram registradas em estereomicroscópio trinocular e avaliadas quanto ao potencial de invasão e variações no perfil de invasão ao ágar. Os morfotipos parental e revertentes mantiveram sua morfologia de colônia padrão e seu perfil de invasão ao ágar semelhantes nas diferentes concentrações de glicose, enquanto os variantes apresentaram variações na morfologia e perfil de invasão ao ágar mais acentuados em maiores concentrações de glicose. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que alterações na concentração de glicose influenciam a macromorfologia e o perfil de invasão ao ágar dos variantes fenotípicos.