Enterococcus faecium pode ser encontrado como comensal da microbiota do trato gastrintestinal de seres humanos e de animais. Entretanto, vem se destacando nas últimas décadas como importante agente etiológico de Infecções Relacionadas a Assistência à Saúde. Isto ocorre, em parte, pelo fato de E. faecium apresentar resistência a vários antimicrobianos e pela capacidade de formar biofilmes, características que dificultam o tratamento das infecções. Neste contexto, os produtos naturais se apresentam como fontes promissoras de novos agentes antibacterianos para o tratamento de infecções causadas por E. faecium. O óleo-resina de copaíba é um produto natural muito utilizado popularmente no Brasil, e apresenta propriedades medicinais, como cicatrizante e anti-inflamatória. Diante do exposto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade do óleo-resina de copaíba (Copaífera martii) em células sésseis (biofilme) de E. faecium resistente a vancomicina (VREfm). Foram analisados 6 isolados clínicos de pacientes atendidos no Hospital Universitário de Londrina-PR e a cepa de referência E. faecium ATCC 6569. Inicialmente, foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) do óleo-resina para os VREfm e a cepa de referência pelo método da microdiluição em caldo, segundo protocolo padrão. Os biofilmes foram formados em meio BHI durante 24 horas e a biomassa foi determinada pela metodologia do cristal violeta (1%). Paralelamente, a viabilidade celular foi estimada pelo ensaio de redução do XTT. Em seguida, foi avaliado o efeito da CIM (0,06 mg/mL) e 2x a CIM do óleo-resina sobre a biomassa e viabilidade das células durante a formação do biofilme e no biofilme maduro, ambos por um período de 24 horas. Os resultados mostram que nas duas concentrações testadas houve redução significativa (p<0,05) tanto da biomassa (média de redução de 94% para CIM e 92% para 2xCIM) quanto da viabilidade celular (média de redução de 72% para CIM e 86,5% para 2xCIM). Os resultados mostram a atividade antibiofilme do óleo-resina de C. martii em VREfm, abrindo perspectivas de estudos para o desenvolvimento de novos fármacos para terapia das infecções persistentes causadas por essa bactéria.