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EntrarINTRODUCTION AND OBJECTIVES: Melanomas are highly aggressive mainly because of their high capacity to metastasize. This scenario is also seen, more alarmingly, in acral melanomas (AM), a poorly studied cutaneous melanoma subtype with fewer therapeutic strategies available. Thus, experimental models that faithfully reproduce the characteristics of human AM progression are urgently needed. Here, we report the preliminary characterization of spontaneous metastases in a collection of xenografts derived from acral melanoma patients (AM-PDX). MATERIAL AND METHODS: Hematoxylin & Eosin (HE)-stained slides representative of all organs collected from AM-PDX-bearing mice were analysed using a brightfield microscope. The suspected presence of human tumour cells in murine organs was further analyzed by immunohistochemical staining of the human cell-specific marker Lamin A/C (M00438, Boster Bio), and the melanoma-specific cell markers Melan A (ab51061, Abcam) and HMB45 (790-4366, Roche). Spread of human tumour cells to murine organs was classified as metastases (>0.2 mm in the greatest extent), and isolated tumour cells (<0.2 mm). PDX Latency time (time for subcutaneous tumours to reach 200 mm3) was calculated as a measure of successful engraftment for all the positive cases. Disease progression and metastatic disease was accessed from the electronic medical records of each patient. This study was approved by the Human and Animal Research Ethics Committees (CEP/CONEP and CEUA). RESULTS AND CONCLUSION: Out of the 49 experimental groups implanted with human AM samples to date, 42% (n=21) reached the experimental endpoint of successful engraftment. Of those, 19 were analyzed and confirmation of metastases and/or isolated tumour cells occurred in 47% (n=9). The groups with no subcutaneous engraftment were also analyzed, but no evidence of metastases and/or isolated tumour cells was observed. The main organs affected by metastases were lung (40%) and liver (40%), but some cases had other anatomic locations affected such as kidney and lymph nodes. In the case of isolated tumour cells, 96% were detected in lungs and 4% in livers. To investigate whether subcutaneous tumour growth time affected tumour cell spread to distant organs, we compared the PDX latency time of the mice with confirmed metastases with the mice with confirmed isolated tumour cell nests, but no difference was observed. To date, we conclude that AM-PDXs can spontaneously spread to distant organs where they form either metastatic nodules or isolated tumour cell nests. The expansion of the AM-PDX collection will allow us to study critical aspects in tumour progression and metastases formation in acral melanoma.
João Marcos de Azevedo Delou
Parabéns pelo trabalho. Excelente apresentação.
Qual a linhagem de camundongo utilizada? Foram utilizados tanto machos quanto fêmeas? De que idades?
Qual o tempo médio para aparecimentos das metástases?
Qual o critério de tempo para o animal ser classificado como parte do grupo "ausência de metástase"?
Existe alguma investigação estatística entre a associação de critérios clínicos dos pacientes (sexo, idade, tamanho do tumor, comprometimento de linfonodos regionais, grau tumoral, classificação molecular, comorbidades, tratamento prévio, etc...) com o sucesso do modelo?
Existe alguma investigação estatística entre a associação de características de sexo, idade, peso, perfil imunológico, perfil de citocinas dos camundongos com o sucesso do modelo?
Qual a quantidade de células injetadas? Qual a via do inoculação das células de pacientes? Qual o veículo das células (meio de cultura, salina, etc)?
Qual o critério de corte dos órgãos? Número de cortes consecutivos ou espaçados avaliados para cada órgão? Qual a espessura dos cortes? É possível estimar o volume de cada órgão que foi cortado e investigado?
Avaliação dos HEs foi feita por patologista com experiência em pequenos animais? Houve treinamento específico dos alunos para esta a avaliação histopatológica e identificação das células de metástase de melanoma?
Quantas pessoas avaliaram cada corte?
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Flávia Aguiar
Olá, João Marcos! Muito obrigada
Então, nosso trabalho é sobre a caracterização de uma plataforma de PDX de melanoma acral, onde um dos parâmetros avaliados é a formação de metástases, cujos resultados prévios foram apresentados nesse resumo.
Nós trabalhamos com camundongos NSG, tanto machos quanto fêmeas de 5 a 10 semanas.
Todos os animais foram sacrificados em seu endpoint de acordo com o tamanho tumoral ou com o tempo após inoculação no subcutâneo. Além disso, como injetamos os fragmentos do tumor, não conseguimos rastrear a formação das metástases, o que inviabiliza estimar o tempo médio para o aparecimento delas.
Quanto as análises estatísticas com os dados dos pacientes, ainda não foram realizadas mas serão feitas futuramente. Já as associações com as características dos camundongos ainda não foram feitas mas pode ser uma boa ideia para o futuro com as algumas informações que já foram coletadas.
Já a respeito das análise dos cortes, elas estão sendo realizadas apenas em um corte por órgão visto que esse não é objetivo principal da plataforma que está sendo construída no momento. Porém temos em mente que em trabalhos futuros cujo objetivo principal será a avaliação da formação das metástases uma busca com cortes seriados será essencial.